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      • 돼지 정자의 성 분리에 의한 단백질 발현 패턴 분석

        정학재,백선영,김용민,조은석,최태정,김영신,이승훈,김봉기,조규호 한국동물생명공학회(구 한국동물번식학회) 2018 발생공학 국제심포지엄 및 학술대회 Vol.2018 No.06

        본 연구는 돼지 정자의 성 분리 후 X, Y 정자에서 발현되는 단백질 차이를 분석하였 다. 정액은 국립축산과학원 양돈과에서 개량용으로 사육중인 듀록 수컷으로부터 채취하 였으며, 성 분리에 사용하기 전에 희석 액에 액상 처리하여 분리에 적용되었다. 정자의 성 분리 방법으로는 마그네틱 비드(magnetic bead)를 이용한 방법을 이용하였으며, 일반 적으로 포유류의 Y-정자는 양성전자를 갖고 있으므로 Y-정자를 마이크로 비드로 결합시 키고, 마이크로 비드를 자력을 이용해서 제거하는 방법을 사용했다. 정자 분리에 이용된 자력은 5,000∼7,000 가우스의 자석이 사용되었고, 정자의 부착력을 고려했을 때 직사각 형의 자석이 가장 효율적인 것으로 알려져 있음. 염화칼슘(0.05∼3 g/증류수 100 mL)이 포함된 정자 희석액(플라보노이드 당 포함)을 이용하여 전하의 경쟁을 유도하였고 정자의 분리 이동 속도와 결합도의 차이를 크게 함으로서 마그네틱 비드가 Y-정자에 특이적으로 결합하게 하였다. 분리한 X와 Y 정자는 two-dimensional (2D) polyacrylamide gel electrophoresis( PAGE) 방법을 이용하여 X와 Y 정자에 존재하는 단백질 발현 패턴을 분석하였 다. X와 Y 정자의 Image analysis 결과, pH가 낮은 산성 쪽에서 단백질 spot이 나타나고 있었으며 차후 LC-MS/MS 분석을 통해 단백질 동정을 예정하고 있다.

      • KCI등재

        최일수 문학비평 연구 : 1950년대 비평담론의 장을 중심으로

        정학재 한국언어문화학회 ( 구 한양어문학회 ) 2002 한국언어문화 Vol.22 No.-

        Chung Hak jae. 2002. A study on Choi il-soo's literary criticism. The purpose o this paper is to clarify that Choi Il-Soo's criticisms sere the search for the literature of the Korean nation. The research method in this paper is Pierre Bourdieu's fields and symbolic struggles. I classified Choi's criticisms into three aspects ; (1) aspect of the literary generation (2) aspect of the attitude to the culture tradition (3) aspect of the attitude to the national literature. (1) About the literary generation, Choi used discourse strategy of inclusion and difference, distinct from other critics' strategy of exclusion and enhancement (2) About the culture tradition, Choi surpassed the strategy of concealment by the tradition negationists and abstract and ideal discourse by the tradition accessionist. His discourse included form and substance. (3) About the national literature, Chung Tae-Yong and Choi's discourses are superior to others. Because they re-defined the nationality through the historical view. (4) Choi's discourses about the national literature were continued to the concern about the third world's literature. (5) Choi's discourses about the national realism were on the basis of the confidence in the progress of history and he had the intenion to the methods of creation. finally, we could understand tat Choi's literary criticisms were superior to others'in the field of 1950's literary criticism about the aspect in the tradition and national literature and it could be more clear when compared with other critical subjects.

      • KCI등재

        Concentration Differences in LH, FSH and Progesterone Secretion among Seasonal Changes in Hanwoo and Holstein Heifers in Daegwallyeong

        정학재,윤현일,이석동,고진성,최연호,최성복,전기준,고응규,이휘철,임석기,이명식 사단법인 한국동물생명공학회 2008 한국동물생명공학회지 Vol.23 No.4

        The objective of present study was to investigate the effect of seasons on reproductive performance of Hanwoo and Holstein heifers. Heat stress in summer or cold stress in winter stress to Hanwoo and Holstein heifers may bring reproduction failure, which would pose an important economic loss, even around Daegwallyeong region located in high mountainous area. Seasonal differences in the serum levels of LH, FSH and progesterone (P4) in response to environmental factors (hot and cold) out of 20 pubertal Hanwoo heifers in Daegwallyeong, Gangwon Province and 20 non-lactating Holstein heifers in Chonan city of Republic of Korea at 2~3 years of age were compared. Blood samples for hormonal analysis were from jugular vein after detection of estrus repeatedly over four seasons within four- week intervals (Spring: May to June, Summer: July to August, Autumn: October to November and Winter: January to February). In Hanwoo heifer population, averages of LH and FSH concentration in spring and in summer were greater compared to those in winter (p<0.05). LH or FSH levels tended to be greater (p=0.06) in spring and less (p=0.09) in winter compared to the levels in autumn. Only in summer, cattle seemed to show lower LH or FSH secretion (p< 0.05). Similar to the results in Hanwoo heifers, the serum concentrations of LH and FSH in Holstein heifers decreased further by heat stress in summer when P4 levels were high during luteal phase. The results demonstrate significant effect of summer heat on reproduction of Hanwoo or Holstein heifers. Although parameters indicating the extent of heat stress were not measured in this study, we suggest that serum hormone levels could be considered as successful indicators of summer heat stress condition for Hanwoo and Holstein heifers even under rather cool summer climate.

      • hEPO 형질전환돼지 유래 세포의 응용

        정학재,심미란,조은별,조유미,최명섭,오미연,정희경,김경운,한덕우,양병철,박진기,장원경,박춘근 한국동물번식학회 2012 Reproductive & developmental biology Vol.36 No.2

        유즙 내에 들어있는 유용 단백질을 분리, 정제하였을 때 예상되는 경제적 가치 때문에 우 리는 유즙 내에 들어있는 재조합 hEPO 단백질을 추출하고 정제하려는 많은 시도를 하고 있다. 이러한 노력에도 불구하고 유즙 내에 들어있는 target 단백질의 정제가 매우 어렵고, 그 순도 역시 20%에 지나지 않는다. 우리는 hEPO 유전자를 가지고 있으며 유선에서 hEPO를 분비하는 형질전환 돼지를 생산 보유하고 있다. 그러나, 이들 형질전환 돼지들은 체내에 도입된 유전자의 발현에 의해 야기되는 적혈구 과다증 그리고 혈소판 감소증과 같 은 순환기의 문제가 유발되고 있다. 명백하게, 이러한 종류의 혈액학적 변화는 장기의 정상 적인 기능을 방해하며 형질전환 돼지의 갑작스런 죽음을 초래한다. 그러므로, 앞서 언급한 문제점들을 해결하기 위한 alternative한 방법이 필요하다. 현재 연구에서, 우리는 외인성 hEPO를 발현하는 돼지에서 비정상의 생리학적 증후에 관해서 실험하였으며 hEPO를 생산 하기 위한 alternative choice로서 형질전환 돼지 유래 세포의 배양 system을 제안하였다. 5마리의 F6 hEPO 형질전환 돼지와 4마리와 대조군으로 일반돼지(랜드레이스)를 국립축 산과학원 동물바이오공학과에서 사육 도축하고 순환 장기를 채취하였다. 형질전환 돼지 순 환기 조직(유선, 신장, 폐, 비장)을 계대 배양 후 hEPO mRNA의 발현을 RT-PCR 방법으로 분석하였다. 또한, 면역조직화학 염색법을 통해서 hEPO 형질전환돼지 순환 장기조직에서 발현되는 hEPO의 발현 양상을 분석한 결과로서 유선, 신장 및 폐 조직에서 hEPO의 발현 이 확인되었으나, hEPO 발현 양상이 모든 형질전환동물 조직에서 발현되는 경향을 보이지 는 않았다. 한편, 세포면역화학 분석법에서는 형질전환돼지 유래 세포의 배양 시 hEPO가 발현되고 있는 양상을 확인하였다. 또한, 형질전환 돼지와 일반돼지의 세포 증식률과 증식 속도는 신장 세포에서는 빠른 증식을 나타낸 반면, 폐와 비장 세포에서는 느린 증식률이 확 인되었다. 배양 후 지속적인 세포 증식과 세포의 생존성을 분석하기 위하여 Apoptosis를 TUNEL과 Annexin V를 이용한 방법으로 조사한 결과, 형질전환돼지 유래의 세포와 일반돼 지의 세포 사이에 유의적 차이는 발견하지 못했다. 이들의 결과들로서 본 연구에서는 형질 전환돼지를 생산하여 유용 단백질을 이용하고자 할 경우, 목적으로 하는 세포 뿐 만 아니라 형질전환가축 유래의 다양한 세포를 이용 할 수 있는 가능성을 시사하고 있다.

      • KCI등재

        Protein Patterns on a Vaginal Mucus during Spontaneous and Estrus Synchronization using CIDR in Korean Native Cattle (Hanwoo)

        정학재,김남국,윤현일,이석동,권혁진,고진성,오해령,최성복,최연호,이휘철 사단법인 한국동물생명공학회 2008 한국동물생명공학회지 Vol.23 No.4

        The aim of the present recent study was to compare the protein patterns in the vaginal mucus of Hanwoo cattles during spontaneous and CIDR induced-estrus. Ten cattles, who had been observed in estrus, received no treatment and served as the group of cattles with normal spontaneous estrus. Thirteen cattles in the CIDR received an CIDR insert on day14 were removed and cattles were injected GnRH on day 15. Vaginal mucus samples were collected from all cattles at the same time the single AI in cattles with spontaneous estrus and the AI in cattles with induced estrus. Spontaneous and CIDR-induced estrus vaginal mucus samples were analyzed on two different array surfaces: cation-exchange (CM10), anion-exchange (Q10). In addition, using the NaCl solution by which the proteins combined after washing are 0.5, 1 and 2 M, it was fractionated and a protein was collected successively. The results are summarized as follows: 1) Ionic surfaces chemistries (Q10 and CM10) gave the best results in terms of detectable protein peaks, with more than 100 protein peaks in the two fractions and under each condition. 2) Protein mass spectrometer using 11 different proteins in protein identification of 7 were able to determine the protein. List of identified proteins as follows; Ribosome-binding protein 1, GRIP 1-associated protein 1, Katanin p60 ATPase-containing subunit A-like 1, Protein FAM44A, DUF729 domain-containing protein 1, Prolactin precursor, Dihydrofolate erductase. Conclusively, on the basis of this study, protein expression in the vaginal mucus could be used as an indicator for time of estrus manifestation in order to increase conception rates by applying AI at an optional time.

      • KCI등재

        Prolonged Expression of Exogenous GFP Gene in the Porcine Embryos generated by Intracytoplasmic Sperm Injection-Mediated Gene Transfer

        정학재,손나래,한주희,박천규,김경운,박미령,황인설,박진기,임기순 사단법인 한국동물생명공학회 2015 한국동물생명공학회지 Vol.30 No.3

        Understanding the behavior of transgenes introduced into oocyte or embryos is essential for evaluating the methodologies for transgenic animal production. To date, many studies have reported the production of transgenic pig embryos with, however, low efficiency in environment of blastocyst production. The aim of present study was to determine the expression and duration of transgene transferred by intracytoplasmic sperm injection-mediated gene transfer (ICSI-MGT). Embryos obtained from the ICSI-MGT procedure were analysed for the expression of GFP and then for the transmission of the transgene. Briefly, fresh spermatozoa were bound to exogenous DNA after treatment by Triton X-100 and Lipofectin. When ICSI-MGT was performed using sperm heads with tails removed, the yield of blastocyst (25.3%), treated with Lipofectin (18.8%) and Triton X-100 (19.2%) were observed. Treatments of Lipofectin or Triton X-100 did not further improve the rates of blastocysts. Moreover, the apoptosis rates of embryos were obtained from the control and LIpofectin groups (8.7%, 9.7%, respectively), but were significantly higher in the Triton X-100 group (13.0%). Our results demonstrated that ICSI-MGT caused minimal damage to oocytes that could develop to full term. Moreover, the embryos derived by ICSI-MGT have shown prolonged exogenous DNA expression during preimplantation stage in vivo. However, more efforts will be required to improve the procedures of both sperm treatments cause of high frequency of mosaicisms.

      • hEPO 형질전환돼지 유래 세포의 응용

        정학재,심미란,조은별,조유미,최명섭,오미연,정희경,김경운,한덕우,양병철,박진기,장원경,박춘근 한국동물번식학회 2012 Reproductive & Developmental Biology(Supplement) Vol.36 No.2s

        유즙 내에 들어있는 유용 단백질을 분리, 정제하였을 때 예상되는 경제적 가치 때문에 우 리는 유즙 내에 들어있는 재조합 hEPO 단백질을 추출하고 정제하려는 많은 시도를 하고 있다. 이러한 노력에도 불구하고 유즙 내에 들어있는 target 단백질의 정제가 매우 어렵고, 그 순도 역시 20%에 지나지 않는다. 우리는 hEPO 유전자를 가지고 있으며 유선에서 hEPO를 분비하는 형질전환 돼지를 생산 보유하고 있다. 그러나, 이들 형질전환 돼지들은 체내에 도입된 유전자의 발현에 의해 야기되는 적혈구 과다증 그리고 혈소판 감소증과 같 은 순환기의 문제가 유발되고 있다. 명백하게, 이러한 종류의 혈액학적 변화는 장기의 정상 적인 기능을 방해하며 형질전환 돼지의 갑작스런 죽음을 초래한다. 그러므로, 앞서 언급한 문제점들을 해결하기 위한 alternative한 방법이 필요하다. 현재 연구에서, 우리는 외인성 hEPO를 발현하는 돼지에서 비정상의 생리학적 증후에 관해서 실험하였으며 hEPO를 생산 하기 위한 alternative choice로서 형질전환 돼지 유래 세포의 배양 system을 제안하였다. 5마리의 F6 hEPO 형질전환 돼지와 4마리와 대조군으로 일반돼지(랜드레이스)를 국립축 산과학원 동물바이오공학과에서 사육 도축하고 순환 장기를 채취하였다. 형질전환 돼지 순 환기 조직(유선, 신장, 폐, 비장)을 계대 배양 후 hEPO mRNA의 발현을 RT-PCR 방법으로 분석하였다. 또한, 면역조직화학 염색법을 통해서 hEPO 형질전환돼지 순환 장기조직에서 발현되는 hEPO의 발현 양상을 분석한 결과로서 유선, 신장 및 폐 조직에서 hEPO의 발현 이 확인되었으나, hEPO 발현 양상이 모든 형질전환동물 조직에서 발현되는 경향을 보이지 는 않았다. 한편, 세포면역화학 분석법에서는 형질전환돼지 유래 세포의 배양 시 hEPO가 발현되고 있는 양상을 확인하였다. 또한, 형질전환 돼지와 일반돼지의 세포 증식률과 증식 속도는 신장 세포에서는 빠른 증식을 나타낸 반면, 폐와 비장 세포에서는 느린 증식률이 확 인되었다. 배양 후 지속적인 세포 증식과 세포의 생존성을 분석하기 위하여 Apoptosis를 TUNEL과 Annexin V를 이용한 방법으로 조사한 결과, 형질전환돼지 유래의 세포와 일반돼 지의 세포 사이에 유의적 차이는 발견하지 못했다. 이들의 결과들로서 본 연구에서는 형질 전환돼지를 생산하여 유용 단백질을 이용하고자 할 경우, 목적으로 하는 세포 뿐 만 아니라 형질전환가축 유래의 다양한 세포를 이용 할 수 있는 가능성을 시사하고 있다.

      • KCI등재

        Human dipeptidylpeptidase-4(DPP-4) 발현 형질전환 돼지의 생산

        정학재(Hak Jae Chung),사수진(Soo Jin Sa),백선영(Sun Young Baek),조은석(Eun Suek Cho),김영신(Young Shin Kim),홍준기(Jun Ki Hong),조규호(Kyu Ho Cho),김지윤(Ji Youn Kim),박미령(Mi Ryung Park),김경운(Kyung Woon Kim) 한국산학기술학회 2019 한국산학기술학회논문지 Vol.20 No.9

        Dipeptidyl peptidase-4 (DPP-4) 저해제는 부작용이 적어 제2형 당뇨병의 2차 용법으로 널리 사용되고 있다. 우리는 human DPP-4 (hDPP-4) 유전자를 돼지 zygote의 전핵에 주입한 후, 1 세포 단계의 수정란을 외과적 방법으로 이식하였고, 마지막으로 꼬리에서 hDPP-4 유전자가 발현되는 형질 전환 돼지를 생산하는데 성공했다. 이식한 3두의 임신돈에서 16두의 자돈이 생산되었고, 이들 가운데 1두의 수컷 자돈에서 형질전환 개체가 확인되었다. Western blot과 RT-PCR 분석을 통해 hDPP-4가 형질 전환 돼지의 막 세포에서 강하게 발현되고, hDPP-4 유전자가 다양한 조직과 꼬리에서 각각 발현되고 있음을 확인하였다. 이것은 발현 벡터가 형질 전환 돼지에서 정상적으로 발현된다는 것을 시사한다. 이번 연구 결과는 인슐린 저항성에 대한 내분비 기능을 확인하는 모델 동물로, hDPP-4 형질 전환 돼지가 인슐린 저항성에 대한 내분비 기능을 확인할 수 있는 새로운 신약에 대한 검증의 소재로서 가치를 높일 것으로 기대된다. As dipeptidyl peptidase-4(DPP-4) inhibitors are used widely as a secondary treatment for type 2 diabetes because they tend to be well tolerated with minimal side effects, the human DPP-4(hDPP-4) gene was injected into a pig zygote through micro-injection, and 1-cell stage fertilized embryos were then transplanted surgically into the oviduct. Three pigs were fertilized with hDPP-4 genes and produced sixteen piglets, in which one male piglet was identified to be transgenic. Finally, transgenic pigs showing hDPP-4 gene expression in the tail were produced. Western blot and RT-PCR analysis confirmed that the hDPP-4 is expressed strongly in the membrane cells of the transgenic pig, and that the hDPP-4 gene appears in various tissues and tails. This suggests that the expression vector is normally expressed in transgenic pigs. These results are anticipated to be a model animal to check the endocrine function for insulin resistance that occurs in a hDPP-4 transgenic pig and to increase its value for use as a material in newly developed medicines.

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