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- 저자 : 임성일(Lim, Sung Il) (검색결과 201 건)
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Achrobacter Protease I (API)의 기질특이성의 전환
임성일,최청,Lim, Seong-Il,Choi, Cheong 한국응용생명화학회 1997 Applied Biological Chemistry (Appl Biol Chem) Vol.43 No.2
Lysine 특이적 serine protease인 Achromobacter protease I(API)의 기질특이성을 결정하는 아미노산 잔기가 255위치에 존재하는 가정하에 이 잔가에 변이를 도입하여 기질특이성의 변화 유무를 조사하였다. 그리고 pro-API이 자기촉매적으로 소화될 수 있도록 Lys(-1) 또는 다른 아미노산 잔기로 치환하였다. 그러나 예상과는 달리 제작된 모든 변이체는 발현되지 않았거나 불활성전구체로서 발현되었다. 이 결과로부터 225위치의 잔기는 API의 maturation과정에 있어 Iysylendopeptidase활성에 중요한 역할을 담당하고 있으나 APl의 기질특이성은 225위치 잔기의 특성에 한정되지 않을 가능성이 시사되었다. Assuming that Asp225 is the substrate specificity determinant of Achromobacter pretense I (APl) which is lysine-specific serine protease, the 225th residue was substituted for other amino acids with a hope that the substrate specificity of a mutant API is altered. Furthermore, to maturate preform of mutant API autocatalytically, Lys(-1) was also replaced by Met, Asp, or Glu. However, all the mutants were not expressed, or accumulated as inactive precursor proteins. This result implicats that Asp225 plays a critical rol in restricted substrate specificity as a lysylendopeptidase but the substrate specificity of API is not determined only by the nature of residue 225.
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Achromobacter Protease 1 ( API )의 기질특이성 결정기의 동정과 변이체 (D225E)의 Ornithine 기질에 대한 촉매활성
임성일,권오진,최청 ( Seong Il Lim,Oh Jin Kwon,Cheong Choi ) 한국응용생명화학회 1997 Applied Biological Chemistry (Appl Biol Chem) Vol.40 No.3
The structural basis of lysine specificity of Achromobacter protease I (API) was investigated by means of site-directed mutagenesis. The precursor protein in which G1u190, one of the two candidates for determining lysine specificity, was substituted by glutamine, aspartic acid or leucine was processed autocatalytically to attain full protease activity with lysine specificity. The substitution of the other candidate, Asp225, for asparagine or leucine produced no mature active forms of pro-API. The precursor protein of the mutant D225E slowly matured autocatalytically. The lysylendopeptidase activity of the mature D225E was 0.25% of that of native API, and this reduced activity is mainly due to a decrease in the affinity of the enzyme for lysine. These results suggest that Asp225 plays a critical rol in restricted substrate specificity as a lysylendopeptidase. However, D225E exhibited no measurable activity for synthetic ornithine substrate. Since the hydroxyl group of Ser194 in this mutant retained essentially the same reactivity to DFP or PMSF as that in native API, it can be noted that a methylene unit longer side chain of residue 225 is not compensated by a methylene unit shorter side chain at subsite P1 in the bound substrate.
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Achrobacter Protease I ( API )의 기질특이성의 전환
임성일,최청 ( Seong Il Lim,Cheong Choi ) 한국응용생명화학회 1997 Applied Biological Chemistry (Appl Biol Chem) Vol.40 No.3
Assuming that Asp225 is the substrate specificity determinant of Achromobacter protease I (API) which is lysine-specific serine protease, the 225th residue was substituted for other amino acids with a hope that the substrate specificity of a mutant API is altered. Furthermore, to maturate proform of mutant API autocatalytically, Lys(-1) was also replaced by Met, Asp, or Glu. However, all the mutants were not expressed, or accumulated as inactive precursor proteins. This result implicats that Asp225 plays a critical rol in restricted substrate specificity as a lysylendopeptidase but the substrate specificity of API is not determined only by the nature of residue 225.
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Achromobacter Protease I (API)의 기질특이성 결정기의 동정과 변이체[D225E]의 Ornithine 기질에 대한 촉매활성
임성일,권오진,최청,Lim, Seong-Il,Kwon, Oh-Jin,Choi, Cheong 한국응용생명화학회 1997 Applied Biological Chemistry (Appl Biol Chem) Vol.43 No.2
부위특이적 변이제작을 통하여 Achromobacter protease I (API)의 lysin에 대한특이성의 구조적 근거를 조사하였다. Lysine 특이성을 결정하는 결정기로서 예상되는 잔기중의 하나인 Glu190을 glutamine, aspartic acid, leucine으로 치환하였을 경우, 전구체단백질은 Iysine 특이성을 가진 완전한 활성효소로서 발현되어 자기촉매적으로 processing되었다. 다른 하나의 잔기인 Asp225을 asparagine, leucine으로 치환한 변이체에서는 불활성 전구체인 pro-API으로서 발현되었으나, 변이체 (D225E)의 경우는 서서히 자기촉매적으로 maturation 되었다. 성숙체인 변이체 (D225E)의 Iysylendopeptidase 활성은 wild-type APl의 0.25%이였으며, 이 활성의 감소는 기질 Iysine과 효소와의 친화력 감소가 주 원인이었다. 이러한 결과로부터 Asp225가 Iysylendopeptidase의 엄격한 기질특이성에 결정적인 역할을 담당한다는 것이 시사되었다. 한편, 변이체 (D225E)는 ornithine 기질에 대해서 효소활성 이 검출되지 않았다. 이 변이체의 촉매잔기인 Ser194가 native API과 마찬가지로 DFP, PMSF와 근본적으로 동일한 반응성이 있는 것으로 나타나 225번 위치의 methylene 1 unit 더 긴 측사는 subsite P1의 methylene 1 unit 짧은 측사에 의해 보상되지 않는다는 것을 알 수 있었다. The structural basis of Iysine specificity of Achromobacter protease I (API) was investigated by means of site-directed mutagenesis. The precursor protein in which Glu190, one of the two candidates for determining Iysine specificity, was substituted by glutamine, aspartic acid or leucine was processed autocatalytically to attaln full pretense activity with lysine specificity. The substitution of the other candidate, Asp225, for asparagine or leucine produced no mature active forms of pro-API. The precursor protein of the mutant D225E slowly matured autocatalytically. The lysylendopeptidase activity of the mature D225E was 0.25% of that of native API, and this reduced activity is mainly due to a decrease in the affinity of the enzyme for lysine. These results suggest that Asp225 plays a critical rol in restricted substrate specificity as a lysylendopeptidase. However, D225E exhibited no measurable activity for synthetic ornithine substrate. Since the hydroxyl group of Ser194 in this mutant retained essentially the same reactivity to DFP or PMSF as that in native API, it can be noted that a methylene unit longer side chain of residue 225 is not compensated by a methylene unit shorter side chain at subsite P1 in the bound substrate.
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임성일(Lim, Sung Il) 한국법학원 2013 저스티스 Vol.- No.134-3
본 논문은 지방자치 실시 이후 전개되어 온 중앙·지방정부간 재정관계에 대해 종합적으로 점검하면서 미래의 재정환경에 적합한 정부간 재정관계를 새롭게 정립하는데 그 목적이 있다. 본 논문에서는 정부간 재정관계의 핵심을 정부간 재정이전제도(보조금제도)로 간주하고 이를 중심으로 현상 진단과 함께 대안을 모색하고 있다. 본 논문에서는 정부간 재정관계의 재구축에 필요한 원칙으로 (1)재정운영의 자율성과 책임성의 연계 강화, (2)정부간 재정관계의 핵심요소에 대한 입법 조치 실현, (3)재정자원 활용의 효율성과 형평성의 조화 모색, (4)중앙·지방간 협력적 상생관계 확대와 갈등관계 최소화, (5)보조금제도의 종합적 연계성 확보를 제시하고 있다. 향후의 중앙·지방정부간 재정관계를 합리적으로 재구조화하는 정책방안으로는 (1)보조금제도와 지방세제도간의 새로운 균형 모색(지방세제도 강화, 보조금제도의 축소·개편), (2)지방의 세입 자율성을 높이는 일반보조금 기능 강화, (3)중앙·지방간 재정관계의 중요한 요소들에 대한 입법 조치 및 제도화(국고보조금제도의 대상사업, 기준보조율, 차등보조 관련 핵심 사항; 지방교부세의 기본구조, 배분공식, 재정수요 및 재정능력 반영 구조; 기타 지방재정에 중대한 영향을 미치는 제도 변화 등), (4)보조금제도 운영의 중앙·지방정부 간 협력적 재정관계 유도, (5)전체 보조금제도에 대한 종합관리시스템 확보 등을 추구하는 것이 바람직하다. The purpose of the article is to reestablish intergovernmental fiscal relations between the central and local governments in Korea in the context of the changing environment of the future. To do this, the study diagnoses the reality of central and local finance, and pursues some desirable alternatives for the intergovernmental fiscal relations, focusing on the intergovernmental fiscal transfers(grant system). The study proposes the principles for the reestablishment of the intergovernmental fiscal relations as follows: (1)strengthening the linkage of fiscal autonomy and responsibility, (2)enacting the most important factors of the intergovernmental fiscal relations, (3)harmonization of the efficiency and equity of fiscal resources, (4)expansion of the mutual cooperation between the central and local fiscal relations and minimization of the conflict, (5)securing the comprehensive management of the whole grants system. To reestablish intergovernmental fiscal relations between the central and local governments in the future, the following policy alternatives are strongly recommended: (1)to establish new balance between the tax and grants systems(strengthening local tax system, and reduction and reshuffling of the whole grants system), (2)to boost up local fiscal autonomy by strengthening the role of general grant, (3)to enact and institutionalize the most important elements of the intergovernmental fiscal relations(kinds of projects, matching ratio, differential grant rates related to the National Subsidies; basic structure and distribution formular of the Local Shared Tax; other important elements causing possible fiscal pressure to local government finance), (4)to induce mutual cooperation between the central and local governments in the area of grants system, (5)to secure efficient management of the whole grant system.
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