허혈성 저산소증을 유도한 분화된 SH-SY5Y 신경세포와 뇌 경색 흰쥐 모델에서의 Erythropoietin의 효과

신은심,김연정,강경아,이종민,전재용 대한정신약물학회 2010 대한정신약물학회지 Vol.21 No.1

Objective The hematopoietic cytokine, erythropoietin (EPO) is known to have neuroprotective effects including promotion of neuronal survival and regeneration after ischemic injury. This study was to investigate the effects of EPO on synaptogenesis and neural restoration in the ischemic condition on neuronal differentiated SH-SY5Y cells and on the behaviors in rat animal model induced by middle cerebral artery occlusion. Methods We analyzed the neurite outgrowth and the gene expression of differentiated human neuroblastoma SH-SY5Y cells after the hypoxic stress. Moreover, we performed the motor functional behavior test in EPO treatment of Sprague Dawley rats following cerebral ischemia induced by middle cerebral artery’s occlusion (MCAO). Results Treatment of 2 and 10 units EPO for 1 week showed increase of neurite outgrowth SH-SY5Y cells, compared with non-treatment group (p < 0.05). The results of reverse transcriptase-polymerose chain reaction (RT-PCR) also showed that both synaptophysin (SYP) genes and Growth Associated protein 43 (GAP43) genes in EPO treated cells w ere significant increased compared with non-treated ischemic group, respectively. The foot fault behavior was recovered in MCAO with EPO treatment group than MCAO group, significantly. Conclusion The elongation of neurite and the increased expressions of SYP and GAP43, and recovered behavioral evidence in the EPO treatment are involved in possible role in neural restoration and synaptogenesis in hypoxic injuried brain. In this study, we suggest that EPO treatment will be may supportive medication to stroke patients to improve the functional brain disturbance. 본 실험은 신경 가소성을 향상시킬 수 있는 약물 중의 하나인 EPO의 효과를 신경세포로 분화된 SH-SY5Y 세포에저산소증을 유도한 후, 신경연접 생성(synaptogenesis)과신경 가소성(neural plasticity)을 관찰하고, 동물모델에서뇌기능의 향상을 확인하고자 하며, 이를 통해 뇌경색 후 나타날 수 있는 정서적 증상을 줄일 수 있는 가능성을 탐색하고자 한다. 신경세포로 분화시킨 SH-SY5Y 세포에 저산소증을 유발하고, EPO(2U, 10U)를 1주일간 처치한 후, neurite outgrowth를현미경하에서 측정하고, synaptophysin과 GAP-43 유전자 발현을 RT-PCR로 확인하였다. 또한, 16~18주령의 수컷 흰쥐(SD rat, 체중 275~325 g)에 MCAO를 시행하여 국소적 허혈 모델을 만든 후, 6일간 EPO를 매일 일정한 시간에 피하 주사하고, 수술 전 날, 수술후 2일(POD2), 1주(POD1wk), 2주(POD2wk), 4주(POD4wk)에 행동실험을 시행하였다. 저산소증을 유도한 후 EPO(2U, 10U)를 투여한 군의 neurite outgrowth가 대조군에 비해 유의하게 증가하였고(p <0.05), SYP, GAP-43 유전자 발현도 통계적으로 유의하게증가하였다. 또한 국소적 뇌허혈 동물모델에서 EPO 투여군의 운동기능 향상이 대조군에 비해 증가하였다 (p < 0.05).

사람유두종바이러스의 검출과 유전자형 분석을 위한 HPV28 Detection 검사와 HPV DNA Chip 검사의 비교 평가

신은심,배효진,송완근,정선경,황유성 대한진단검사의학회 2013 Laboratory Medicine Online Vol.3 No.4

Background: The HPV28 Detection test (Seegene) is a real-time polymerase chain reaction assay that is designed for testing a total of 28 human papillomavirus (HPV) genotypes and estimating the approximate HPV viral load. The aim of this study was to evaluate the clinical applicability of the HPV28 Detection test with regard to the prevalence of HPV infection and distribution of HPV genotypes by using the HPV28 Detection and HPV DNA Chip tests (Biomedlab). Methods: HPV DNA Chip and HPV28 Detection tests were performed for 500 cervical swab specimens. HPV genotype results were confirmed by sequencing analysis of the specimens that showed discordant results in the 2 test methods. Results: The positive rate of HPV detection determined by using HPV28 Detection and HPV DNA Chip tests were 43.8% and 40.6%, respectively. The sequencing results in 64 discordant specimens that showed single HPV infection in the 2 test methods were in complete agreement with the test results obtained with the HPV28 Detection test. The genotyping results of the HPV28 Detection test were 100% concordant in repeated experiments with HPV-infected specimens that have 12 different HPV genotypes, i.e., types 16, 31, 33, 39, 42, 51, 52, 53, 58, 66, 68, and 70. The HPV28 Detection test was 100-fold more sensitive than the HPV DNA Chip test with serially diluted HPV DNAs. Conclusions: The HPV28 Detection test can be applied in the clinical field as an HPV genotyping test can accurately identify various HPV genotypes with high specificity and low detection limit.

한국인 집단에서 알츠하이머 치매의 임상적 진단을 위한 ApoE 유전자와 BchE-k 변이형과의 상승관계에 관한 연구

신은심 ( Eun Sim Shin ),정호진 ( Ho Jin Choung ),장미선 ( Mi Sun Chang ),윤송로 ( Song Ro Yoon ),임용빈 ( Yong Bin Eym ),이기철 ( Gi Chul Lee ),이강희 ( Kang Hee Lee ),김재종 ( Jae Jong Kim ),최수경 ( Soo Kyung Choi ) 대한임상검사과학회 1999 대한임상검사과학회지(KJCLS) Vol.31 No.2

The Apolipoprotein E type 4 allele (ApoE e4) is genetically associated with the common late onset familial and sporadic forms of Alzheimer``s disease. ApoE gene is located on chromosome 19, and the three common alleles are designated e 2, e 3, and e 4. The e 4 gene is a major risk factor for late onset Alzheimer``s disease(LOAD). It has been reported that the polymorphic k variant of butyrylcholinesterase (BchE-k) has an elevated frequency in AD patients carrying the e 4 allele of ApoE when compared with a nonnal hea1thy group. BchE activiη in the brain increases around age 60 and is elevated in AD. The BchE-k variant, which is the common variant of the BchE gene, has been reported to show allelic association with AD in subjects who are also carriers of the e 4 allele of ApoE, especilly in subjects over the age of 75. This study was performed to evaluate the distribution of ApoE and BchE genotype in healthy and AD group and to evaluate the synergy between BchE-k variant and ApoE з 4 in AD. ApoE and BchE genotype were determined in DNA samples from 610 healthy group and 60 LOAD patients by using ARMS a11ele specific oligonucleotides (ASOs) amplification by standard agarose gel electrophoresis. πle efIect of ApoE E з4 was significant1y associated with AD(p<0.05). A comparison between AD patients and the hea1thy individua1s, both with the E 4 a11ele, indicated an interaction between BchE-k and ApoE E з4(p<0.05). The association of BchE-k with AD was limited to carriers of ApoE E 4 a11ele, among whom the presence of BchE-k gave an odds ratio of AD of 3.48 (95% C.I. 1.3-9.2). Together these resu1ts suggested that further evidence of an association between ApoE E 4 and LOAD, and BchE-k acts in synergy with ApoE E з4 as a susceptibility gene for AD.

A new mosaic der(18)t(1;18)(q32.1;q21.3) with developmental delay and facial dysmorphism

최영진,신은심,조태식,문진화,이세민,김주화,오재원,김창렬,설인준 대한소아청소년과학회 2016 Clinical and Experimental Pediatrics (CEP) Vol.59 No.2

We report the case of a 22-month-old boy with a new mosaic partial unbalanced translocation of 1q and 18q. The patient was referred to our Pediatric Department for developmental delay. He showed mild facial dysmorphism, physical growth retardation, a hearing disability, and had a history of patent ductus arteriosus. White matter abnormality on brain magnetic resonance images was also noted. His initial routine chromosomal analysis revealed a normal 46,XY karyotype. In a microarray-based com- parative genomic hybridization (aCGH) analysis, subtle copy number changes in 1q32.1–q44 (copy gain) and 18q21.33–18q23 (copy loss) suggested an unbalanced translocation of t(1;18). Repeated chromosomal analysis revealed a low-level mosaic translocation karyotype of 46,XY,der(18)t(1;18)(q32.1;q21.3)[12]/46,XY[152]. Because his parents had normal karyotypes, his translocation was considered to be de novo. The abnormalities observed in aCGH were confirmed by metaphase fluore- scent in situ hybridization. We report this patient as a new karyotype presenting developmental delay, facial dysmorphism, cerebral dysmyelination, and other abnormalities.

Application of array comparative genomic hybridization in Korean children under 6 years old with global developmental delay

이경연,신은심 대한소아청소년과학회 2017 Clinical and Experimental Pediatrics (CEP) Vol.60 No.9

Purpose: Recent advancements in molecular techniques have greatly contributed to the discovery of genetic causes of unexplained developmental delay. Here, we describe the results of array comparative genomic hybridization (CGH) and the clinical features of 27 patients with global developmental delay. Methods: We included 27 children who fulfilled the following criteria: Korean children under 6 years with global developmental delay; children who had at least one or more physical or neurological problem other than global developmental delay; and patients in whom both array CGH and G-banded karyotyping tests were performed. Results: Fifteen male and 12 female patients with a mean age of 29.3±17.6 months were included. The most common physical and neurological abnormalities were facial dysmorphism (n=16), epilepsy (n=7), and hypotonia (n=7). Pathogenic copy number variation results were observed in 4 patients (14.8%): 18.73 Mb dup(2)(p24.2p25.3) and 1.62 Mb del(20p13) (patient 1); 22.31 Mb dup(2)(p22.3p25.1) and 4.01 Mb dup(2)(p21p22.1) (patient 2); 12.08 Mb del(4)(q22.1q24) (patient 3); and 1.19 Mb del(1)(q21.1) (patient 4). One patient (3.7%) displayed a variant of uncertain significance. Four patients (14.8%) displayed discordance between G-banded karyotyping and array CGH results. Among patients with normal array CGH results, 4 (16%) revealed brain anomalies such as schizencephaly and hydranencephaly. One patient was diagnosed with Rett syndrome and one with Möbius syndrome. Conclusion: As chromosomal microarray can elucidate the cause of previously unexplained developmental delay, it should be considered as a first-tier cytogenetic diagnostic test for children with unexplained developmental delay.

Application of Array-Based Comparative Genomic Hybridization to Pediatric Neurologic Diseases

변정혜,은백린,신은심,김건하,이경옥,홍영숙,이주원 연세대학교의과대학 2014 Yonsei medical journal Vol.55 No.1

Purpose: Array comparative genomic hybridization (array-CGH) is a technique used to analyze quantitative increase or decrease of chromosomes by competitive DNA hybridization of patients and controls. This study aimed to evaluate the benefits and yield of array-CGH in comparison with conventional karyotyping in pediatric neurology patients. Materials and Methods: We included 87 patients from the pediatric neurology clinic with at least one of the following features: developmental delay, mental retardation, dysmorphic face, or epilepsy. DNA extracted from patients and controls was hybridized on the Roche NimbleGen 135K oligonucleotide array and compared with G-band karyotyping. The results were analyzed with findings reported in recent publications and internet databases. Results: Chromosome imbalances, including 9 cases detected also by G-band karyotyping, were found in 28 patients (32.2%), and at least 19 of them seemed to be causally related to the abnormal phenotypes. Regarding each clinical symptom, 26.2% of 42 developmental delay patients, 44.4% of 18 mental retardation patients, 42.9% of 28 dysmorphic face patients, and 34.6% of 26 epilepsy patients showed abnormal array results. Conclusion: Although there were relatively small number of tests in patients with pediatric neurologic disease, this study demonstrated that array-CGH is a very useful tool for clinical diagnosis of unknown genome abnormalities performed in pediatric neurology clinics.

P-28 : High-risk HPV 검출을 위한 Hybrid Capture IIⓡ High-risk HPV Test 정량검사와 HPV type 16, 18 Real-time PCR의 유용성 평가

성혜순,조유정,박민영,서민영,신은심 대한임상병리사협회 2012 임상미생물검사학회 발표자료집 Vol.2012 No.-

배경: HPV (Human Papilloma virus)는 자궁경부암을 유발시키는 DNA virus로, 자궁경부암환자의 약 99%에서 HPV 감염이 보고되고 있다. HPV는 현재까지 100여 종의 유전자형이 보고되고 있으며, 그 중 40여종이 생식 기관에서 발견되고 있다. HPV viral load의 양이 높을수록 자궁경부암으로 진행되는 위험도가 증가하는 것으로 보고되고 있으며, 자궁경부암과 연관성이 높다고 알려진 고위험군 13종(16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68) 중 특히 HPV type 16, 18은 검출 빈도가 높고 예후가 좋지 않아 자궁경부암 진단 및 예방에 중요한 요인으로 작용하고 있다. 이에 HPV 분석에 많이 이용되고 있는 Hybrid Capture IIⓡ High-risk HPV Test 정량검사와 HPV type 16, 18을 검출 할 수 있는 real-time PCR을 수행하여 검사방법의 유용성을 평가하였다. 방법: 고위험군 HPV 검사를 위해 의뢰된 cervical swab samples 1,437건을 대상으로 Hybrid Capture IIⓡ High-risk HPV Test (QIAGEN, USA)를 수행하였고, 그 중 고위험군 HPV가 양성으로 검출된 샘플에서 HPV type 16, 18 real-time PCR 을 수행하여 빈도를 분석하였다. 결과: 전체 1,437건의 cervical swab sample 중 Hybrid Capture IIⓡ High-risk HPV Test 정량검사에서 고위험군 HPV가 검출된 건은 330건으로 23%의 비율이었으며, 고위험군 HPV 양성검체 중 real-time PCR에서 16 type은 11%(37/330), 18 type은 2.7%(9/330)의 비율로 검출 되었다. 고찰: Hybrid Capture IIⓡ High-risk HPV Test 정량검사는 HPV viral load를 측정할 수 있어 자궁경부암의 진행 가능성을 예측하여 예방할 수 있는 중요 인자로, 이와 함께 자궁경부암과 높은 연관성을 보이는 HPV type 16, 18을 구분하여 검출 할 수 있는 real-time PCR을 수행한다면 환자의 진단과 예후 관찰에 사용할 수 있는 유용한 자료가 될 것으로 사료된다.

A De Novo Centric Fission of Chromosome 11 in a Patient with Recurrent Miscarriages

심성한,이철훈,이지연,신은심,Jee Hong Kyhm,박문일,정성노,조율희 대한의학회 2007 Journal of Korean medical science Vol.22 No.1

P-34 : HCV Genotype 구분을 위한 5`-UTR Region과 Core Region을 이용한 Direct Sequencing의 유용성 사례 보고

성혜순,정성환,박민영,김령효,신은심 대한임상병리사협회 2012 임상미생물검사학회 발표자료집 Vol.2012 No.-

배경: Hepatitis C virus(HCV)는 7개의 major genotype(1, 2, 3, 4, 5, 6, 7)과 80여종의 subtype으로 구분되며 이 중 1, 4형의 경우 IFN-α치료에 어려움이 있어 간경화 등으로 질환이 심화될 위험성이 높고, 간 이식 후에도 간질환의 발생 빈도가 높은 반면 2, 3형은 IFN-α치료의 예후가 좋은 유전형으로 알려져 있어 임상적으로 HCV 유전형의 구분은 환자 치료에 유용한 자료가 되고 있다. 그러나 현재 HCV 유전형을 구분할 수 있는 여러 검사방법들이 1a형과 1b형, 2a형과 2c형 등과 같이 몇몇 subtype의 명확한 구분에 어려움을 겪고 있어 이에 HCV genome 중 5’-UTR gene과 core gene 두 가지 부위를 이용하여 direct sequencing으로 구분한 사례를 보고하고자 한다. 방법: HCV 5’-UTR region을 이용하여 direct sequencing(ABI 3730, USA)으로 분석한 HCVgenotype에서 subtype의 결과가 1a/1b로 판정된 세 건의 임상 검체에 대하여 HCV core region을 이용한 direct sequencing으로 분석하여 확인하였다. RT-PCR은 각각의 region에 특이적인 primer를 이용하여 nested RT-PCR을 수행하고 증폭산물을 대상으로 direct sequencing하여 genotype 판정은 HCV sequence database와 NCBI database를 이용하였다. 결과: 실험에 사용한 세 건의 검체 중 1건에서는 5’-UTR gene에서 1a/1b로 core gene에서도 1a/1b의 혼합감염으로 동일하게 분석되었으나 두건의 검체에서 5’-UTR gene에서 1a/1b로 혼합감염으로 분석된 건에서 core gene으로 분석한 결과가 1b 단독 감염으로 분석되어 상이한 결과를 보였다. 고찰: 최근 HCV genotype에 대한 연구가 활발히 진행되면서 계속해서 새로운 subtype이 구분되고 있다. HCV genotype이 C형 간염 환자의 치료에 사용하는 약제와 높은 연관성이 있는 만큼 그 정확한 genotye의 구분이 필요한 상황이며, 이에 정확한 genotype 구분이 어려운 case에서는 5’-UTR region 과 core region의 혼용 등 여러 가지 target 부위로 검증하는 것이 유용한 자료가 되리라 사료된다.

P-33 : HBV 만성간염 환자에서의 HBV X/Pre-core Region Mutation과 HBeAg 생성 간의 상관성 연구

성혜순,정성환,박민영,서민영,신은심 대한임상병리사협회 2012 임상미생물검사학회 발표자료집 Vol.2012 No.-

배경: HBV는 우리나라 인구의 약 5~8%가 감염되어 있을 정도로 높은 감염빈도의 바이러스로 전체 간질환의 66%가 HBV에 의하여 발생되며, HBV 보균자의 약 10%가 간암으로 발전하고 간암 발병률은 비보균자에 비하여 223배나 높다고 보고되고 있다. 최근 HBV X/ Pre-core region의 돌연변이가 HBeAg 생성과 연관이 있고, 이는 간암환자에서 높은 빈도로 나타난다는 보고가 있어 본 연구에서는 HBeAg과 HBV X/ Pre-core region의 돌연변이의 상관성에 대하여 검증하고자 한다. 방법: 만성 B형 간염 환자 중 HBV Real-time PCR(CAP/CTM, Roche, Switzerland)에서 100,000 copies/mL 이상의 viral load와 HBeAg 에서 음성인 환자의 검체와 100,000 copies/mL 이상의 viral load와 HBV eAg 에서 양성인 검체 각 10건을 대상으로 HBV X/Precore region의 특이 Primer로 Nested PCR을 수행하고 direct sequencing(ABI 3730, USA)으로 염기서열을 분석하였으며, 8군데의 돌연변이(G1613A, C1653T, T1753V, A1762T, G1764A, A1846T, G1896A 와 G1899A)여부를 판정하였다. 결과: HBV에서 양성(Viral load>100,000 copies/mL), HBeAg에서 음성인 검체 10건 중 8군데의 돌연변이 빈도는 각각 T1753V(2/10, 20%), A1762T(6/10, 60%), G1764A(6/10, 60%), A1846T(2/10, 20%), G1896A(0/10, 0%), G1899A(2/10, 20%)로 나타났으며, HBV에서 양성(Viral load>100,000 copies/mL), HBeAg에서 양성인 검체 10건에서는 1753V(6/10, 60%), A1762T (8/10, 80%), G1764A(8/10, 80%), A1846T(3/10, 30%), G1896A(6/10, 60%), G1899A(2/10, 20%)로 나타났다. 고찰: 본 실험결과 A1846T, G1899A를 제외하고 T1753V, A1762T, G1764A, G1896A에서는 HBV양성이면서 HBeAg 양성인 검체에 비하여 HBeAg 음성인 검체에서 유의한 돌연변이를 발견할 수 있었다. 최근 B형 간염 환자의 치료에 HBV 다제약제내성을 확인하기 위한 돌연변이 검사가 유용하게 사용되고 있다. HBV X/Precore region의 돌연변이 분석 또한 HBeAg과 viral load를 연관하여 좀 더 많은 연구가 이루어진다면 향후 B형 간염환자의 간암으로의 발전 예측 및 예방에 좋은 지표로 사용될 수 있을 것으로 사료된다.