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        • 대장균에서 재조합 Rat Guanine deaminase 유전자의 발현, 정제 및 분석

          성연선,곽상준,박대성,김향원,이희영 단국대학교 1998 論文集 Vol.33 No.-

          Guanine deaminase(EC, 3.5.4.3, ;Guanine aminohydrolase, GAH, GDA) catalyzes the deamination reaction of guanine to xanthine irreversibly. The cDNA encoding rat guanine deaminase had been isolated from a λZAPII rat brain expression library using antibody generated against purified rat guanine deaminase. Toe obtain recombinant GDA and analyze the property of catalytically conserved retion, here we expressed the recombinant GDA in E.coli and showed the retention of its catalytic activity similar to native rat GDA. To make the construct carrying coding region to GDA in pGEX4T prokaryotic expression vector, the region encompassing open reading frame of pBlue-GDA was PCR amplified and subcloned into pGEX4T prokaryotic expression vector with correct reading frame of fusion carrier glutathione S-transferase. After transformation to E.coli DH5a. The bacteria carrying pGEX-GDA was grwon in the condition of IPTG induction. The fusion protein GST-GDA was purified with GSH-sepharose affinity chromatography. The purified GST-GDA was subsequently digested with biotin-conjugated thrombin, and thrombin was removed by streptavidin agarose. Then sample were treated with GSH-sepharose affinity chromatography to remove the contaminant GST and GST-GDA. The purified recombinant GDA showed 70% of specific activity relative to that of purified rat GDA. The recombinant GDA showed identical molecular weight with rat GDA in SDS-PAGE.

        • SCIESCOPUSKCI등재

          v-Src 과발현과 관련된 세포주기인자의 변화

          성연선,곽상준,한정아 대한암학회 1999 Cancer Research and Treatment Vol.31 No.2

          목적: 활성형 암유전자인 v-src을 발현하는 세포주를 확립하여 부유상태에서의 성장능력을 포함하는 변형된 세포의 성질을 확인하고 세포증식능력과 세포주기의 특성 및 조절인자의ㅣ 변화를 대조 세포군과 비교, 동정하여 이와 관련된 신호전달경로에 대한 이해를 높이고자 하였다. 재료 및 방법: Swiss 3T3 세포주에 calcium phosphate의 방법으로 v-src유전자를 이입하고 western blotting, phosphotyrosine blotting 및 soft agar assay로 적합한 세포주군을 선택하여 세포성장속도를 측정하였다. Flow cytometry와 BrdU incorporation assay로 세포주기내의 각단계에 세포가 분포하는 양상 및 진행속도를 비교하여 보았다. 한편 부유성장계에서 배양된 세포들의 성장정도, 세포주기 진행상황과 더부어 세포주기 관련 단백질의 발현 양상을 immunoblotting으로 동정하였다. 결과: 획득된 3T3/v-src 세포주는 세포내 단백질의 tyrosine잔기의 인산화정도 및 부유상태에서 성장하는 능력의 관점에서 다른 연구자 등의 보고와 동일하였다. 측정한 세 개의 독립된 세포주 모두에서 대조군보다 population doubling time이 짧아졌으며 G_1 세포주기 단계(2n)에 분포하는 분획은 감소하고 G_2/M분획(4n)이 증가하는 경향을 보였다. Dual staining flow cytomerty를 통하여 대조군과 3T3/v-src 모두에서 G_0/G_1에 위치하는 대부분의 세포가 휴지상태(G_0)가 아님을 알 수 있었다. 부유상태의 대조군에서 소멸된 cyclin A가 3T3/v-src에서는 회복되었고 cyclin E의 발현도 증가하였다. 결론: Swiss 3T3에서 v-Src단백질의 발현은 세포주기 및 성장에 관한 지표에 영향을 미치는 것을 알게 되었으며 이 단백질의 과발현으로 부유성장능을 획득하는데 cyclin A가 참여하는 가능성을 알게되었다.

        • SCIESCOPUSKCI등재

          세포 전암성 Yes 단백질의 Unique-SH3 Domain 과 결합하는 단백 리간드의 검색과 분석

          성연선,곽상준 대한암학회 1998 Cancer Research and Treatment Vol.30 No.2

          목적: 전암성 유전자의 단백질 산물인, c-Yes의 unique-SH3부위를 매개로하여 결합하는 리간드 단백질의 cDNA를 분리하고 염기서열을 결정하여 이로부터 유추되는 아미노산 서열로부터 PXXP motif의 공통적인 특징을 규명하고 이와 관련되는 신호전달경로에 대하여 이해를 높히고자 하였다. 재료 및 방법: 유전자 재조합방법으로 c-Yes 단백질의 unique-SH3부위만을 만들었다. 그리고 이를 ^32P로 표지하고 이를 탐식자로 사용하여 태령 16일의 mouse로부터 제조된 cDNA expression library로부터 단백-단백 결합을 하는 clone들을 얻어 염기서열을 결정하였다. 이들 중에서 p130^Cas와 Kv 1.5내의 PXXP motifs의 유무에 따른 결합여부를 검사하였고 p130^Cas의 경우 면역침전방법으로 Yes와 결합함을 재차 확인 하였다. 결과: 7개의 clone들을 양성으로 판정하여 분석한 결과 그중 2개는 개시부위가 다른 Efs의 부분 clone들이었다. 다른 2개는 rat AP17의 mouse omologue였으나 이 2개 모두에서 frameshift 돌연변이가 일어나 원래의 단백질에는 없는 PXXP부위가 인공적으로 만들어졌다. 나머지 3개는 p130^Cas와 activated c-Yes(Y535F)가 함께 면역침전 되는 것이 관찰되었다. 결론: c-Yes의 SH3부위에 대응하는 리간드의 PXXP motifs의 배열은 class Ⅰ에 부합하였고 활성화된 Yes는 p130^Cas와 결합하며 이를 매개로하여 세포내 adhesion complex와 관련된 신호전달과정에서 Src과 상호 보완적인 기능(redundancy)을 지닐 가능성이 큰 것을 알게 되었다.

        • KCI등재

          순위 정렬 선다형 평가 문항을 적용한 초등학교 4∼6학년 학생들의 물의 순환에 대한 학습 발달 과정

          성연선 ( Yeon Seon Seong ), 맹승호 ( Seung Ho Maeng ), 장신호 ( Shin Ho Jang ) 한국초등과학교육학회 2013 초등과학교육 Vol.32 No.2

          This study investigated elementary students` (grade 4∼6) learning progressions for water cycling drawn from iterative assessments using ordered multiple-choice (OMC) items. An assessment system, which consisted of construct map, item design, outcome space, and measurement model, was employed in this study to examine children`s learning progressions. At the first stage of the assessment system, a construct map was designed on which children`s conceptual understandings from naive to most sophisticated were represented. At the item design stage, 8 OMC items were drawn from the construct map. Each item option of the OMC items was scored from 0 to 3 according to its level of understanding at the stage of outcome space. As a measurement model, Rasch model, a branch of item response theory, was applied to interpreting the outcomes of the OMC items. This cycle of assessment system was furtherly implemented iteratively in order to elaborate on the first version of water cycling learning progression. In conclusion, children`s understanding of water cycling could be described in two aspects: water distribution and water movement. We identified children`s conjectural developmental pathways about water cycling existed from superficial and naive accounts to more complex and abstract accounts.

        • KCI등재SCOPUS
        • KCI등재

          β-TrCP1 degradation is a novel action mechanism of PI3K/mTOR inhibitors in triple-negative breast cancer cells

          이용원,성연선,Edward,Jeong,Bae,오성훈,배인수,강효진 생화학분자생물학회 2015 Experimental and molecular medicine Vol.47 No.-

          An F-box protein, β-TrCP recognizes substrate proteins and destabilizes them through ubiquitin-dependent proteolysis. It regulates the stability of diverse proteins and functions as either a tumor suppressor or an oncogene. Although the regulationby β-TrCP has been widely studied, the regulation of β-TrCP itself is not well understood yet. In this study, we found that the level of β-TrCP1 is downregulated by various protein kinase inhibitors in triple-negative breast cancer (TNBC) cells. A PI3K/mTOR inhibitor PI-103 reduced the level of β-TrCP1 in a wide range of TNBC cells in a proteasome-dependent manner. Concomitantly, the levels of c-Myc and cyclin E were also downregulated by PI-103. PI-103 reduced the phosphorylation of β-TrCP1 prior to its degradation. In addition, knockdown of β-TrCP1 inhibited the proliferation of TNBC cells. We furtheridentified that pharmacological inhibition of mTORC2 was sufficient to reduce the β-TrCP1 and c-Myc levels. These results suggest that mTORC2 regulates the stability of β-TrCP1 in TNBC cells and targeting β-TrCP1 is a potential approach to treathuman TNBC.

        • KCI등재

          자궁경부암에서 FHIT 유전자의 단백질 발현 및 이형성 소실

          김수연,성연선 대한산부인과학회 2000 Obstetrics & Gynecology Science Vol.43 No.4

          FHIT는 1996년 Ohta group에 의하여 처음으로 밝혀진 가족성 신세포암에서의 염색체 전좌 부위이며, 여러 암에서 microsatellite의 결손이 보고된 염색체 3p14영역에서 positional cloning된 유전자이다. 최근에는 FHIT발현 이상의 빈도가 폐암, 유방암, 소화기암, 두경부암 등 여러 암조직에서 높게 보고되어 아마도 이 유전자가 암억제유전자인 것으로 추정되고 있다. 그리고 FHIT 유전자 부위에는 HPV 16 DNA의 염색체 융합 부위로 추정되는 FRA3B 유전자가 포함되어 있어 있고 이에 대한 연구가 활발히 진행되고 있다. 본 연구에서는 자궁경부암 발생에 있어 FHIT의 역할을 규명하기 위하여 정상, 전암병변 및 침윤성 자궁경부암 조직에서 FHIT 단백질 발현 양상을 면역조직화학염색을 통하여 관찰하고, FHIT 유전자내의 D3S1300, D3S1234와 3′쪽의 D3S1295의 microsatellite에 대하여 이형성소실(loss of heterozygosity)를 PCR을 통해 분석하여 다음과 같은 결과를 얻었다. FHIT 단백의 발현은 정상 자궁경부상피의 기저층과 자궁경부내구의 선상피세포에서 강하게 발현되었다. 자궁경부내구의 편평화생과 전암 병변에서 FHIT의 발현은 유지되었으나, 침윤암에서는 소실되었다. 스푼형 편평상피세포에서는 FHIT의 발현이 감소되었다. 자궁경부암에서 FHIT 유전자 영역의 microsatellite 분석상, D3S1300 및 D3S1234에서 LOH가 일부 관찰되었으나, D3S1295에서는 관찰되지 않았다. 본 연구결과 FHIT는 전암 병변에서는 발현이 있지만 침윤성암으로 발전하게 되면서 소실되는 특성을 보인다. 이러한 사실로 FHIT는 자궁경부암에서 암억제유전자의 가능성이 높다. 또한 HPV 감염이 의심되는 스푼형 편평상피세포에서 FHIT발현이 감소하였고, FHIT유전자에 HPV 융합부위인 FRA3B가 포함되어 있다는 점, 그리고 FHIT의 LOH가 FRA3B 영역에 가까운 부위에서 많이 일어난다는 점으로 보아 HPV의 감염이 FHIT의 발현을 억제하는 것으로 추정되고, 이것이 자궁경부암의 침윤성 획득에 있어서 중요한 유전적 변이인 것으로 생각된다. Allelic deletions involving the short arm of chromosome 3(3p13-21.1) have been observed frequently in cervical carcinomas. Recently the fragile histidine triad(FHIT) gene was cloned and mapped to this chromosomal region(3p14.2). From various studies involving tumor cell lines and primary cancers, the FHIT gene has been presumed to be a candidate for tumor suppressor gene involving various tumors. In FHIT gene, the most common aphidicolin-inducible fragile site, FRA3B exists and the FRA3B has been considered as a region of the spontaneous integration site of HPV 16. In order to elucidate the role of the FHIT in carcinogenesis of cervical cancer, this study was designed to investigate both the expression of FHIT protein in normal, preinvasive and invasive cancer samples employing immunohistochemical study and allelic loss of FHIT gene locus against several microsatellite markers employing the PCR analysis. Immunohistochemical studies of FHIT protein revealed following features. In normal ectocervical squamous epithelium, the expression of FHIT was relatively weak and confined to the basal layer, but in normal endocervical glandular epithelium it was very strong. The expression of FHIT was reduced as the tumor progressed from early lesion to invasive cancer. The koilocytosis was associated with diminished expression of FHIT protein. The study of allelic loss of FHIT gene locus was undertaken against two intragenic (D3S1300, D3S1234) and one extragenic (D3S1295) microsatellite markers. The 5th intron, D3S1300, showed allelic change in 6 of 15 assays and 7th intron, D3S1234 showed allelic change in 10 of 29 assays. There was no apparent LOH from 29 assays in D3S1295. In conclusion, the expression of FHIT protein was markedly reduced or absent in cervical squamous cell carcinoma and the chromosome breakage in FHIT region might be related to the diminished expression of FHIT. On the basis of the reduced expression of FHIT and its encompassment of FRA3B region, it is suggested that disruption of FHIT, a putative tumor suppressor gene, might be the mechanism by which HPV infection enhances cervical tumorigenesis and clonal outgrowth.

        • KCI등재

          2-Aminoethoxydiphenyl Borate(2-APB)를 이용한 IP3 수용체억제가 와우유모세포의 Gentamicin에 의한 이독성에 미치는 영향

          문정환,정재윤,안진철,성연선,임은석,이정구 대한이비인후과학회 2007 대한이비인후과학회지 두경부외과학 Vol.50 No.5

          Background and Objectives:Elevated intracellular calcium level is known to play important roles in the apoptotic pathway. IP3 receptor (ligand-gated channels that release Ca2+ from intracellular stores) is emerging as a key site for regulation of apo-ptosis. 2-Aminoethoxydiphenyl borate (2-APB)APB on gentamicin ototoxicity in vitro, using the HEI-OC1 cell line. Materials and Method:HEI-OC1 cells were treated with 100μM gentamicin. Using a CaspACE assay, we measured the caspases-3 activity in the gentamicin treated hair cells with and without 2-APB pre-incubation. We also observed intra-cellular calcium concentrations in HEI-OC1 cels using a confocal micro-scopy (calcium gren-1 stain). Live cel imaging was performed by using fluorescence video-time lapse system. Results:Cytosolic calcium elevation by gentamicin was remarkably inhibited by 2-APB. Caspases-3 activities of gentamicin treated cells APB, caspases-3 activities and cel death of gentamicin treated cels were shown to decrease. Conclusion:2-APB reduces Caspases-3 activity in the gentamicin treated HEI-OC1 cells by inhibi-tion of cytosolic calcium increase. (Korean J Otolaryngol 2007 ;50 :385-90)

        • KCI등재후보

          Genomewide transcription profiles altered by BMI-1026 and Roscovitine and its implication in cellular senescence

          이지혜,민창희,곽상준,성연선 한국바이오칩학회 2012 BioChip Journal Vol.6 No.4

          Cyclin-dependent kinases (CDKs) are highly conserved over evolutionary path and function as master regulators of the cell division cycle. Thus CDK inhibitors have been focused in the drug development for cancer and other cell proliferative disorders. Among these inhibitors Roscovitine is well known compound and under clinical trial currently while far less has been reported on another CDK inhibitor - BMI-1026, designed as a drug candidate also targeting the cell cycle. In this study we tried to define biological effects and possible mechanisms of the two chemicals by analyzing the altered transcriptome profiles when BMI-1026 and Roscovitine are applied on WI-38 cells. Our result revealed both BMI-1026 and Roscovitine produced similar gene expression profiles, where E2F target genes were suppressed in common, including cyclin A, MCM3 and PCNA along with activated p53 pathway. This finding strongly indicates that molecular machineries responsible for other established senescence models are also employed in the changes in WI-38 cells induced by the two CDK inhibitors.

        • KCI등재

          The centrosomal localization of KM-HN-1 (MGC33607) dependson the leucine zipper motif and the C-terminal coiled-coildomain

          Hye,Jeong,Park,Hyun-Joo,Seo,Hyun-Woo,Kim,Jung,Soon,Kim,So-Yoon,Hwang,성연선 생화학분자생물학회 2007 Experimental and molecular medicine Vol.39 No.6

          KM-HN-1 is a C-terminal coiled-coil domain containing protein previously referred to as image clone MGC33607. This protein has been previously identified as a cancer/testis antigen and reported as nuclear and tisera with the GST fusion protein and identified them as a 105 kDa protein. Motif analysis showed that this protein harbors the leucine zipper motif in internal 1/3 region and the coiled-coil domain in the C-terminal region. Using the ful length and various deletion mu-tants, we determined the motif that governs the sub-celular localization of KM-HN-1. Imunofluorescence staining of the endogenous KM-HN-1 and various kinds of GFP-tagged KM-HN-1 revealed that KM-HN-1 localizes to the centrosomes as well as nucleus. The centrosomal localization-determining region of this protein is C-terminal coiled-coil domain in which the leucine zipper motif and the nuclear export signal (NES) harbor.

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