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내열성 제한효소인 Svi Ⅰ을 생성하는 Streptomyces 분리균주의 수리 동정
배무,윤미섭,김형태,이계준,Bae, Moo,Yun, Mi-Sub,Kim, Hyoung-Tae,Lee, Kye-Joon 이화여자대학교 생명과학연구소 1993 생명과학연구논문집 Vol.4 No.-
새로운 제한효소인 Svi I을 생성하는 Streptomyces속 한 균주(D2-5)를 토양으로부터 분리하여 형태적 관찰 및 수리동정을 실시하였다. 50개의 분류 단위 형질을 분석하였고 이 실험결과를 TAXON program에 적용하여 종의 수리 동정을 실시하였다. 그 결과 분리균 D2-5는 Streptomyces의 제 18 주군집에 속하며 이 군집에 속하는 S. violochromogenes와 유사성이 가장 높은 것으로 나타났다. 따라서 분리주는 Streptomyces violochromogenes의 한 균주로 동정하였다. Numerical identification was carried out for an isolate of Streptomyces D2-5 producing a new restriction endonuclease Svi I. Fifty taxonomic unit characters were tested and the data were analyzed numerically using the TAXON program. the isolate was best matched to Streptomyces violochromogenes in the major cluster 18 of Streptomyces. Therefore, it was concluded that the isolate was identified to be a member of Streptomyces violochromogenes.
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Streptomyces diastatochromogenes로부터 분리된 SdiⅠ의 특성에 관한 연구
배무,송은숙,황혜연,임정빈 이화여자대학교 생명과학연구소 1994 생명과학연구논문집 Vol.5 No.-
토양분리 방선균 Streptomyces diastatochromogenes로부터 분리된 제한효소 SdiI은 넓은 범위의 pH(7.0~1.5)와 온도(-60℃)에서 활성을 보였으며, 고농도(-500mM) NaCI이 있어도 작용하였다. 또한, 20~60℃ 온도에서 안정하며, 활성을 갖기 위해서는 MgCI_2를 필요로 하였다. Lambda DNA에 대한 지도 작성으로부터 XhoI의 isoschizomer로 추정되었으며, DNA 염기서열 분석 결과, 인식, 절단 서열은 다음과 같이 결정되었다. In catalytic propeties of the restriction endonuclease. SdiI, which was purified from Streptomyces diastatochromogenes, this enzyme was active at wide range between pH 7.0 and 12.5, and up to 60℃ and 500mM of NaCl concentration. It was stable between 20℃ and 60℃, and essentially requires MgCl_2 for endonuclease activity. The restriction map of lambda DNA which was obtained by double digestion with various enzymes suggested SdiI to be an isoschizomer of XhoI. From the determination of restriction site based on DNA sequencing method, recognition and cleavage specificity of SdiI was concluded as:
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Pseudomonas syringae pv. phaseolicola로부터 제한효소의 분리정제 및 특성
배무,이은영 이화여자대학교 생명과학연구소 1994 생명과학연구논문집 Vol.5 No.-
Pseudomonas syringae pv. phaseolicola로 부터 새로운 제한효소 Psy1을 분리하여 그 촉매적 특성에 관하여 조사하였다. 효소의 정체를 위하여 70g의 균체를 이용하였고, 300watt에서 6분간(2분간 3번씩) 열을 위헤서 초음파 마쇄하였다. 이것을 streptomycin sulfate 침전, ammonium sulfate 침전, phosphocellulose pll, DEAE-cellulose, hydroxyapatite, Sephadex G-100 column chromatography를 통해 정제하여 순수한 단백질을 얻었다. 그 단백실 subunit의 분자량은 0.1%의 SDS를 포함하는 polyacrylamide gel에서 전기 영동한 결과를 토대로 분석한 결과 약 50,000 dalton으로 추정된다. 이 효소의 촉매적 성질은 pH7에서 pH10 사이의 광범위한 pH 영역에서 안정하였고, 적정반응온도는 30℃에서 37℃였으며, 그 온도 안정성은 25℃에서 45℃ 사이로 나타났다. 이 효소는 20mM 이상의 MgCl_2, 25mM 이상의 NaCl에서 활성이 저해되었으며, 2-mercaptoethanol 400mM까지 첨가시 계속 활성을 보였고, 플라스미드인 pBR 322와 pUC 18, 그리고 pBS등을 절단할 수 있었다. Lamda DNA를 여러 종류의 제한효소로 절단하여 제한효소 지도를 작성한 결과 SalI의 isoschizomer로 확인되었고 염기서열의 조사 결과로도 확인하였다. A restriction endonuclease, PsyI, has been isolated from Pseudomonas syringae pv. phaseolicola, and its catalytic properties have been studied. This enzyme was purified through streptomycin sulfate and ammonium sulfate fractionation, phosphocellulose pll, DEAE-cellulose, hydroxyapatite and Sephadex G-100 column chromatography. It's molecular weight was about 50,000 dalton as determined by 7.5% polyacrylamide gel electrophoresis containing 0.1% SDS. In catalytic properties, PsyI shows stable at wide ranges of pH between 7.0 and 10.0 of temperature between 30℃ and 37℃, and its thermal stability is between 25℃ and 45℃ at the presence of 10 mM MgCl_2 PsyI essentially require Na salt for enzyme reaction, is rather inhibited in the high Na salt concentration. The presence of 2-mercaptoethanol is absolutely required for the enzyme activity. This endonuclease, PsyI was determined to be an isoschizomer of SalI from the results of the restriction mapping and DNA sequencing.
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한국 염전으로 부터 분리한 고도 호염성 세균의 동정 및 특성
배무,이정임 이화여자대학교 생명과학연구소 1991 생명과학연구논문집 Vol.2 No.-
국내염전으로부터 14주의 호염성 세균을 분리하여 10,20,25,30% NaCl농도에 따른 증식으로부터 염요구성을 조사하고 동정에 필요한 생리실험과 최적 증식 조건을 조사하였다. 14균주중 5주는 중도 호염성 세균이고 9주는 고도 호염성 세균으로 Halobacterium sp. 6주와 halococcus sp. 3주가 분리되었다. Halobacterium EH8 및 EH10은 4.2M NaCl 농도에서는 잘 증식하였으나 2.0M NaCl 이하 염농도에서는 증식하지 않았고 비운동성이며 포도당, 과당으로부터 산을 생성하였다. 그러나 포도당의 자화능력은 극히 저조하며 G+C 함량도 상이하여 기존 기재된 종과는 생리학적 성질이 일치하지 않아 Halobacterium 속의 새로운 종으로 추정된다. 그중 EH10균주의 최적증식 NaCl 농도는 25%(4.2M)였고, 최적 증식 온도는 50℃로 나타났으며 NaCl로 대치하였을 경우 증식하지 않았다. Extremely halophilic bacteria isolated from salterns at Mado, Kyunggido, Korea, were identified and investigated on their salt requirements. The results have shown that six strains were identified to be belonged to the genus Halobacterium and three strains identified as the genus Halococcus. Among them, the optimal NaCl concentration for growth of Halobacterium sp. EH10 was at 4.2 M and no growthe occurs below 2.0M NaCl. The strain, EH10, is nonmotile and showed acid production from glucose, fructose and maltose while H. salinarum is motile and does not produce acid from any carbohydrates. On the other hand, the strain EH10 does not utilize readily glucose while a number of sugars are reakily utilized for growthe with acid production by H. saccharovorum. Thus, the isolate, EH10, was classified into the genus Halobacterium and could be a novel species of the genus by its main morphological and physiological features including G+C content. The optimal temperature for grow the of the isolate, EH10, was 50℃. But this strain did not grow when NaCl was replaced with KCI.
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Streptomyces diastatochromogens로부터 제한효소 SdiI의 분리정제
배무,송은숙,Bae, Mu,Song, Eun-Suk 한국미생물학회 1994 미생물학회지 Vol.32 No.4
토양에서 분리한 방선균에서 제한효소 활성을 조사하여 그 가운데 Streptomyces diastatochromogenes로부터 제한효소 활성을 확인하였다. 이 균주의 제한효소 SdiI을 균체 15g으로부터 streptomycin sulfate침전, ammonium sulfate 침전, hydroxylapatite colume chromatography, Sephacryl S-200 HR column chromatography, hydroxylapatite column chromatography의 단계를 거쳐 분리하였고, SDS-polyacrylamide gel-electrophoresis에 의하면 소단위체 분자량은 약 35,000Da으로 추정되었다. About thirty bacterial strains of actinomycete isolated from the soil were examined for the presence of restriction endonuclease activity. Streptomyces diastatochromogenes, which was identified previously, was found to contain restriction endonuclease activity. The purification of this enzyme, SdiI, was carried out via streptomycin sulfate precipitation and ammonium sulfate fractionation followed by hydroxylapatite column chromatography. Sephacryl S-200 HR column chromatography and second hydroxylapatite column chromatography. SDS-polyacrylamide gel electrophoresis of the active protein (purified from various column chromatography) resulted in 35,000 Da protein.
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