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형광 Peptide를 이용한 Streptomyces griseus IFO 13350의 인산화 단백질 동정
허진행 ( Jin Haeng Her ),정용훈 ( Yong Hoon Choeng ),김종희 ( Jong Hee Kim ),신수경 ( Soo Kyung Sin ),현창구 ( Chang Gu Hyun ),강상순 ( Sang Soon Kang ),천재순 ( Jae Sun Chun ),강대경 ( Dae Kyung Kang ),홍순광 ( Soon Kwang Hong 한국미생물생명공학회 2002 한국미생물·생명공학회지 Vol.30 No.3
정용훈,이일한,홍승표,성문희,홍순광 명지대학교 자연과학연구소 2004 자연과학논문집 Vol.23 No.-
방선균의 유전자는 그 구조의 특이성으로 외래 숙주에서는 발현이 거의 되지 않아 단백질 발현에 많은 어려움이 있다. 지금까지 다양한 벡터들이 방선균에서의 발현을 목적으로 개발되어 사용하여 왔지만, 이들은 유전자를 발현시키고자 할 때마다 발현 유전자의 특성에 맞게 벡터 및 유전자를 제조합시켜야 하는 불편함이 있었다. 따라서 본 연구에서는 방선균에서 쉽게 사용할 수 있는 두 가지의 초고속 발현 백터를 제작하였다. 제작된 pFSE와 pFSE-extra 벡터는 방선균에서 replication이 가능한 pIJ101 replication origin과 selection marker인 tsr(thiostrepton) 유전자를 가지고 있으며, 대장균에서도 replication이 가능한 shuttle vector 이다. 두 pFSE 벡터는 방선균에서 강력히 발현되는 강력 promoter ermEp를 가지고 있으며, pFSE-extra 벡터는 Streptomyces griseus에서 분비되는 단백질을 코드하는 유전자 sghC의 promoter 및 분비시그널을 포함하는 영역으로 구성되어 있어, 각각 하부에 연결된 유전자의 발현을 세포내에서 또는 세포 밖으로 분비하는 특성을 가지고 있다. 두 벡터의 발현시스템에는 AspEI으로 절단되는 제한 부위를 가지고 있으며, 효소로 절단 시 간단히 T-vector로 이요할 수 있는 초고속 발현 시스템이다. The genes of streptomycetes are hardly expressed in other host systems because of their unique structure. Many expression systems for the streptomycetes genes have been developed, yet modification of vector and target genes is the essential prerequisite, which make a limit in their use. To make expression easier in efficient and fast way, two kinds of expression systems, named pFSE and pFSE-Extra, were constructed, Both plasmids have the repication origins from pIJ101 and pBlescript and can be used as Streptomyces-E. coli shuttle vectors. The plasmid pFSE has the strong promoter derived from ermE and designed for the intracellular expression of streptomycetes genes in Streptomyces host system. pFSE-extra has the promoter region including the secretion signal originated from the sghC gene that was identified to encode massively secreted protein from Streptomyces griseus and can be used for the secretion of the expressed protein in Streptomyces also. Both plasmids can be used as T-vector cloning system after digestion with AspEI restriction enzyme, which make their application broader as the fast expression system in Streptomyces.