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Matrigel이 황체화과립막세포에 미치는 영향에 대한 형태학적 관찰
기숙현(Suk-Hyun Ki),황일태(Il-Tae Hwang),유영복(Young-Bok Yoo),이병란(Byeong Lan Lee) 대한해부학회 2000 Anatomy & Cell Biology Vol.33 No.3
본 연구는 세포사이물질이 배양상태에서 세포들에 영향을 미친다는 점에 착안하여 세포사이물질의 일종인 바닥막성분 과 유사한 Matrigel이 사람의 황체화과립막세포 (LGCs)의 에 미치는 영향을 파악하는 것을 목적으로 하였다. 사람의 LGCs를 poly-D-lysine 혹은 Matrigel을 입힌 배양면 위에서 6일동안 배양하면서 위상차 광학현미경을 이용하여 그 형태를 관찰하였고 bromodeoxyuridine (BrdU) 표지후 BrdU와 3β-hydroxysteroid dehydrogenase (3β-HSD)에 대한 이중면 역세포화학염색을 시행하였다. 아울러 방사면역측정법을 이용하여 프로제스테론의 분비량을 측정함으로써 LGCs의 증식 및 분화상태를 비교하였다. 그 결과 poly-D-lysine을 사용한 배양상태에서는 세포가 배양표면에 납작하게 부착되어 자라는 반면에 Matrigel 위에서는 3차원적 구조를 형성하였다. 이중세포면역화학염색의 결과로서는 Matrigel과 poly-D-lysine 배양에서 3β-HSD 양성세포 및 음성세포의 일부에서 BrdU가 표지되는 것으로 관찰되었다. 프로제스테론의 분비는 배양 4일까지 증가하다가 그후 감소하였으며, 배양일수가 경과함에 따라 두 군 사이의 차이가 증가하여 배양 5~6일에서는 Matrigel 군이 poly-D-lysine군보다 약 2배의 프로제스테론을 분비하였다. 따라서 Matrigel을 이용한 배양법은 생체에서와 유사한 배양환경을 만드는데 기여함으로써 향후 LGCs의 성장 및 분화 기전과 그 기능을 조절하는 물질들의 작용기전을 밝히는데 기여를 할 것으로 사료된다. This study investigated the effect of Matrigel on the differentiation and proliferation of luteinized granulosa cells in vitro. Human luteinized granulosa cells (LGC), obtained after the oocyte retrieval from the IVF process were cultured either on plastic or on Matrigel. Phase-contrast microscopy showed that LGC were flat and attached on the surface of poly-D-lysine while they formed three dimensional cell aggregates when cultured on Matrigel. Bromodeoxiuridine (BrdU) labeling followed by immunocytochemistry for BrdU and 3β-hydroxysteroid dehydrogenase (HSD) demonstrated that BrdU-labeld cells were shown in both of the 3β-HSD positive and negative granulosa cells when cells were cultured on Matrigel and on poly-D-lysine. Progesterone secretion was increased until culture day 4, and then slightly decreased. The difference in progesterone secretion between the cells cultured on Matrigel and those on poly-D-lysine was increased, as the culture day was increased. The results suggested that Matrigel provides a better culture environment for LCG and maintains proliferation of LCG.
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