과산화수소 불활화 잉어봄바이러스 백신의 면역원성과 방어효능 평가 = Immunogenicity and protective efficacy of hydrogen peroxide-inactivated spring viremia of carp virus vaccine

국문 초록 (Abstract)

과산화수소 불활화 잉어봄바이러스 백신의 면역원성과 방어 효능 평가 신인주 응용생물과학과 수산생명의학전공 선문대학교 일반대학원 본 연구는 잉어봄바이러스병(spring viremia of carp, SVC)의 원인체인 spring viremia of carp virus (SVCV)에 대한 안전하고 효과적인 불활화 백신의 개발을 목표로 수행되었다. 기존 불활화제로 널리 사용되는 포름알데 히드는 면역원성 저하 및 잔류 독성과 관련된 한계가 보고되고 있어, 본 연 구에서는 독성이 낮고 환경 친화적 특성을 갖는 과산화수소를 대체 불활화제 로 사용하여 과산화수소 불활화 백신을 제작하고 백신으로서의 효능을 평가 하고자 하였다. SVCV 배양액에 0.1~3% (v/v) 농도의 과산화수소로 처리한 결과, 1%와 3%에서 바이러스 감염가가 완전히 소실되는 것을 확인하였다. 이 후 1% 과 산화수소 불활화 조건으로 제작된 과산화수소 불활화 백신(P vac) 및 보조제 로서 MontanideTM GEL 02를 P vac에 첨가한 백신(P vac+GEL 02)을 비단 잉어(Cyprinus carpio)에 접종하고 면역원성과 방어효능을 평가하였다. 백신 접종 비단잉어에서 항체가 생성되었는지 확인하기 위해 백신 접종 4주차 및 공격실험 7일차에 ELISA를 분석하였다. 백신 접종 4주차의 대조군 의 ELISA 값이 0.045인 것에 비해 P vac과 P vac+GEL 백신군 에서 각각 0.337 및 0.301의 높은 ELISA 값을 보였다. 또한 공격실험 7일차의 대조군 의 ELISA 값은 0.031이었으나, P vac과 P vac+GEL 백신 백신군은 각각 0.195와 0.385의 값을 보였다. 백신 접종 4주차에 샘플링한 비장 시료를 대상으로 면역 유전자 발현을 분석한 결과, P vac 백신군에서 TNF-α(2.6배), IL-6(5.6배), CD4-2 (91.1 배), IL-8 (6.6배) 및 Vip2 (5.7배)의 발현 증가가 확인되었다. 또한 P vac+GEL02 백신군에서도 IL-8 (3.6배), IL-1β (5.7배), IFN-I (2.3배) 및 TGF-β (54.1배)가 유의적으로 증가하였다. SVCV 인위감염에 대해 대조군은 45% 생존했으나 P vac 백신군은 93.33% 생존하여 87.77%라는 높은 상대생존율을 보였고 조직 내 바이러스 량도 104.01 TCID50/mL 이하로 낮은 농도를 보였다. 한편 P vac+GEL02 백 신군은 55% 생존하여 대조구와 생존율에서 큰 차이를 보이지 못했으며 폐사 어에서는 출혈 등의 임상증상이 관찰되었다. 한 조직 내 바이러스 량도 105.88 TCID50/mL 정도로 P vac 백신군에 비해 다소 높은 농도를 보였다. 종합적으로, 본 연구는 과산화수소를 이용한 SVCV 불활화 백신이 비단잉 어에서 높은 면역원성을 가지며 SVCV 감염에 대한 높은 방어효과를 부여함 을 입증하였다. 이러한 결과로 SVC 예방을 위한 수산용 과산화수소 불활화 백신은 수산용 백신으로서의 적용 가능성이 있다고 판단된다. 주제어 : 잉어봄바이러스(SVCV), 과산화수소, 불활화 백신, MontanideTM GEL 02, 면역원성, 방어효능

목차 (Table of Contents)

• 제1장 서론 1
• 제2장 재료 및 방법 4
• 1. 세포 및 바이러스 4
• 2. 과산화수소를 이용하여 바이러스 불활화 조건 설정 5
• 3. 실험어 및 백신 준비 6
• 4. In vivo 7
• 4.1. Vaccination 7
• 4.2. Lethal does 50% (LD50) 7
• 4.3. 공격 실험 8
• 5. Antibody detection ELISA 10
• 6. 면역유전자 발현 확인 11
• 7. 조직 내 바이러스 역가 비교 13
• 8. 통계 분석 14
• 제3장 결과 15
• 1. 과산화수소 불활화 조건 15
• 2. SVCV에 대한 잉어 항체 검출 17
• 3. 면역유전자 발현 19
• 4. 임상증상 비교 21
• 5. 조직 내 바이러스 역가 비교 23
• 6. Lethal does 50% (LD50) 25
• 7. 과산화수소 불활화 SVCV 백신의 방어력 확인 27
• 제4장 고찰 29
• 제5장 참고문헌 34
• Abstract 45