점농어(Lateolabrax maculatus)에 대한 Renibacterium salmoninarum의 병원성 평가 = Pathogenicity of Renibacterium salmoninarum in spotted sea bass (Lateolabrax maculatus)

국문 초록 (Abstract)

Bacterial kidney disease (BKD)는 Renibacterium salmoninarum을 원인체로 하는 질병으로 신장 및 비장 내 백색 결절, 복수, 근육 출혈 등의 증상을 보인다. 이는 국내에서 법정전염병으로 지정되어 있지 않아, 해당 질병 발생 시의 관리 방안이 마련되어 있지 않다. 2020년에는 국내 최초로 전남 고흥의 연어 양식장 에서 BKD가 발생하였고, 260일간 치어 50%, 미성어 100%가 폐사되었다. 하지 만 260일 동안 폐사가 지속되었음에도 별도의 방역 조치 없이 사육이 이루어져 R. salmoninarum에 오염된 사육수는 자연수계에 지속적으로 배출되었다. 이는 해양 생태계는 물론, 국내 연안의 다양한 양식 어종에도 영향을 미칠 가능성이 있으므로, 본 연구에서는 주요 양식 어종인 점농어(Lateolabrax maculatus)를 대 상으로 R. salmoninarum의 병원성을 평가하였다. 점농어(평균 체중: 4 g)에 대한 R. salmoninarum (GenBank number: MT023376)의 병원성을 조사하기 위해 두 가지 실험을 실시하였다. 첫 번째로 3개의 실험구에 R. salmoninarum을 8.9 × 105, 8.9 × 106, 8.9 × 107 cells/fish 의 농도로 각 50 ㎕씩 36마리에 복강 주사한 후, 순환여과식 실험 수조(수온 14 ± 0.5℃)에 70일간 사육하며 누적 폐사율을 조사하였다. 빈사 및 폐사 개체가 발생할 경우, 임상 증상을 관찰하였고, kidney disease medium – 2 (KDM – 2)와 brain heart infusion agar (BHIA)에 신장과 간 조직을 도말하여 15 ± 1℃에서 세균을 분리하였다. 또한, 빈사 개체는 신장, 비장, 간, 심장 등의 조직을 10% 포르말린에 고정한 후, hematoxylin – eosin (H – E) 염색하여 병변을 관찰하였다. 두 번째로 시간 경과에 따른 조직 내 R. salmoninarum 세균 수의 변화를 측정 하기 위해 2개의 실험구에 R. salmoninarum을 8.9 × 105, 8.9 × 106 cells/fish 로 접종하였다. 접종 1, 9, 15, 33, 52, 70일째에는 각 5마리씩 무작위로 수집하였 고, 신장과 간을 KDM - 2에 도말하여 세균 수를 조사하였다. R. salmoninarum을 점농어 치어에 접종하여 누적 폐사율을 조사한 결과, 8.9 × 107 cells/fish에서 20% (7/36), 8.9 × 106 cells/fish에서 3% (1/36)의 누적 폐 사율을 보였다. 병어에서는 아가미 빈혈(8/8마리), 장 내 액상 물질(6/8마리), 간 발적(4/8마리) 및 비장 비대(4/8마리)의 임상 증상을 보였다. 모든 빈사 및 폐사 개체의 신장과 간 조직에서는 R. salmoninarum이 다수 분리되었으며, 빈사 3개 체를 대상으로 한 병리조직학적 검사에서는 신장, 비장, 간 및 췌장 조직의 괴사, 심근과 심외막의 염증성 세포 침윤 및 췌장 조직 괴사부 주변의 섬유질이 관찰 되었다. 시간 경과에 따른 조직 내 R. salmoninarum 세균 수의 변화를 확인한 결과, 8.9 × 106 cells를 주사한 그룹은 1, 9, 15일째에 신장 조직에서 평균 약 230 - 323개의 콜로니를 보였고, 33일째부터는 콜로니가 거의 분리되지 않았다. 8.9 × 105 cells를 주사한 그룹은 1, 9, 15일째에 신장 조직에서 평균 약 67 - 208개의 콜로니를 보였고, 33일째부터는 콜로니가 거의 분리되지 않아 세균 수는 8.9 × 106 cells 주사 그룹보다 낮게 나타났지만 유사한 경향을 보였다. 이상의 결과를 종합하면, R. salmoninarum에 감염된 점농어 치어는 폐사가 발 생하고, 폐사된 개체로부터 다수의 R. salmoninarum이 분리되고, 다양한 장기에 서 괴사 병변을 보이기 때문에 R. salmoninarum은 점농어 치어에 병원성을 보이 는 것으로 확인되었다.

목차 (Table of Contents)

• 목차 ⅰ
• 그림 목차 ⅲ
• 표 목차 ⅷ
• 국문 초록 ⅸ
• 1. 서론 1
• 2. 재료 및 방법 9
• 가. 실험어 9
• 1) 실험어 수집 9
• 2) 병원체 검사 9
• 나. 실험 균주 10
• 다. R. salmoninarum의 병원성 조사 10
• 1) 접종액 10
• 2) 병원성 실험 11
• 라. 조직 내 R. salmoninarum 세균 수의 변화 12
• 마. polymerase chain reaction (PCR) 14
• 바. 병리조직학적 관찰 15
• 3. 결과 16
• 가. R. salmoninarum의 병원성 조사 16
• 1) 병원성 실험 16
• 2) 폐사 및 빈사 개체로부터 분리한 세균에 대한 PCR 검사 21
• 3) 병리조직학적 분석 22
• 나. 조직 내 R. salmoninarum 세균 수의 변화 28
• 1) R. salmoninarum의 세균 수 측정 28
• 2) PCR 32
• 4. 고찰 33
• 참고문헌 40
• Abstract (영문초록) 47