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      The Analgesic and Anti-inflammatory Effect of Gynostemma Pentaphyllum Extract in Osteoarthritis in vivo and in vitro Study

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      https://www.riss.kr/link?id=T17373970

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      국문 초록 (Abstract) kakao i 다국어 번역

      목적: 본 연구는 교고람[絞股藍(돌외, 七葉膽), (Gynostemma pentaphyllum, GP)] 추출물(GPE)이 퇴행성 골관절염 유발 동물 모델의 통증 및 염증에 미치는 영향에 대하여 구명(究明)하고자 하였다.

      실험방법: 본 실험은 MIA(monosodium iodoacetate)로 유발된 쥐 관절염 의 염증 및 연골에 교고람이 미치는 영향을 살피기 위하여 weight bearing, 연골 퇴행의 육안적 평가, 혈청 염증성 사이토카인 측정과 아 세트산으로 유도된 통증 - 몸부림 반응, LPS에 의해 자극된 RAW 264.7 세포에서 염증 유도 사이토카인과 염증성 물질의 단백질 발현 정도를 관찰하였다.

      결과:
      1. 교고람 추출물의 유효성분은 지페노사이드(gypenoside) III, 루틴(rutin) 이었다.
      2. MIA 유발 관절염의 뒷다리 weight bearing 관찰에서 교고람 300 mg/kg 및 인도메타신 3 mg/kg 투여군 각각은 대조군에 비하여 현저한 증가를 보였다.
      3. MIA 유발 관절염의 연골 관찰에서 교고람 300 mg/kg 및 인도메타신 3 mg/kg 투여군 각각은 대조군에 비하여 현저한 회복을 나타내었다.
      4. MIA 유발 관절염의 혈청 사이토카인 IL-1β 및 IL-6를 측정에서 교 고람 300 mg/kg 및 인도메타신 3 mg/kg 투여군 각각은 대조군에 비하 여 현저한 감소를 보였다.
      5. 아세트산 유발 몸부림 반응 빈도에서 교고람 추출물 200, 600 mg/kg 및 이부프로펜 200 mg/kg 투여군 각각은 대조군에 비하여 현저한 감소 를 나타내었다.
      6. LPS 자극 RAW 264.7 세포에서 교고람 추출물 10, 30, 100, 300 μ g/mL 및 덱사메타손 1 μg/mL 투여군 각각은 세포독성을 유발하지 않 았으며, NO는 교고람 추출물 투여군에서 농도 의존적으로 감소하였다.
      7. MIA 유발 무릎 관절염 연골의 IL-1β, IL-6, NOS2, Ptger2, MMP-1, MMP-3, MMP-8, MMP-13의 mRNA 발현에서 교고람 추출물 300과 인도 메타신 3 mg/kg 투여군 각각은 대조군에 비하여 유의한 감소를 보였고, IL-1β, IL-6, NOS2, Ptger2, MMP-3 관찰에서 교고람 추출물 300 mg/kg 과 인도메타신 3 mg/kg 투여군은 각각 대조군에 비하여 현저한 감소를 나타내었다.
      8. LPS 자극 RAW 264.7 세포에서 교고람 30, 100, 300 μg/mL 및 덱사 메타손 1 μg/mL 투여군 각각은 IL-1β, IL-6, NOS2, Ptger2, COX-2, TNF-α, MMP-3, MMP-13의 mRNA 발현을 현저하게 감소시켰고, IL-1 β, IL-6, NOS2, MMP-3 및 MMP-13 관찰에서 대조군에 비하여 현저한 감소를 나타내었다. 결론: 교고람은 동물 모델의 무릎 골관절염 및 통증 세포수준에서 염증 을 개선하는 결과를 보였으며, 향후 교고람 약침 등의 임상 적용 연구 가 진행되어야 할 것으로 기대된다.
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      목적: 본 연구는 교고람[絞股藍(돌외, 七葉膽), (Gynostemma pentaphyllum, GP)] 추출물(GPE)이 퇴행성 골관절염 유발 동물 모델의 통증 및 염증에 미치는 영향에 대하여 구명(究明)하고자 하였다. 실...

      목적: 본 연구는 교고람[絞股藍(돌외, 七葉膽), (Gynostemma pentaphyllum, GP)] 추출물(GPE)이 퇴행성 골관절염 유발 동물 모델의 통증 및 염증에 미치는 영향에 대하여 구명(究明)하고자 하였다.

      실험방법: 본 실험은 MIA(monosodium iodoacetate)로 유발된 쥐 관절염 의 염증 및 연골에 교고람이 미치는 영향을 살피기 위하여 weight bearing, 연골 퇴행의 육안적 평가, 혈청 염증성 사이토카인 측정과 아 세트산으로 유도된 통증 - 몸부림 반응, LPS에 의해 자극된 RAW 264.7 세포에서 염증 유도 사이토카인과 염증성 물질의 단백질 발현 정도를 관찰하였다.

      결과:
      1. 교고람 추출물의 유효성분은 지페노사이드(gypenoside) III, 루틴(rutin) 이었다.
      2. MIA 유발 관절염의 뒷다리 weight bearing 관찰에서 교고람 300 mg/kg 및 인도메타신 3 mg/kg 투여군 각각은 대조군에 비하여 현저한 증가를 보였다.
      3. MIA 유발 관절염의 연골 관찰에서 교고람 300 mg/kg 및 인도메타신 3 mg/kg 투여군 각각은 대조군에 비하여 현저한 회복을 나타내었다.
      4. MIA 유발 관절염의 혈청 사이토카인 IL-1β 및 IL-6를 측정에서 교 고람 300 mg/kg 및 인도메타신 3 mg/kg 투여군 각각은 대조군에 비하 여 현저한 감소를 보였다.
      5. 아세트산 유발 몸부림 반응 빈도에서 교고람 추출물 200, 600 mg/kg 및 이부프로펜 200 mg/kg 투여군 각각은 대조군에 비하여 현저한 감소 를 나타내었다.
      6. LPS 자극 RAW 264.7 세포에서 교고람 추출물 10, 30, 100, 300 μ g/mL 및 덱사메타손 1 μg/mL 투여군 각각은 세포독성을 유발하지 않 았으며, NO는 교고람 추출물 투여군에서 농도 의존적으로 감소하였다.
      7. MIA 유발 무릎 관절염 연골의 IL-1β, IL-6, NOS2, Ptger2, MMP-1, MMP-3, MMP-8, MMP-13의 mRNA 발현에서 교고람 추출물 300과 인도 메타신 3 mg/kg 투여군 각각은 대조군에 비하여 유의한 감소를 보였고, IL-1β, IL-6, NOS2, Ptger2, MMP-3 관찰에서 교고람 추출물 300 mg/kg 과 인도메타신 3 mg/kg 투여군은 각각 대조군에 비하여 현저한 감소를 나타내었다.
      8. LPS 자극 RAW 264.7 세포에서 교고람 30, 100, 300 μg/mL 및 덱사 메타손 1 μg/mL 투여군 각각은 IL-1β, IL-6, NOS2, Ptger2, COX-2, TNF-α, MMP-3, MMP-13의 mRNA 발현을 현저하게 감소시켰고, IL-1 β, IL-6, NOS2, MMP-3 및 MMP-13 관찰에서 대조군에 비하여 현저한 감소를 나타내었다. 결론: 교고람은 동물 모델의 무릎 골관절염 및 통증 세포수준에서 염증 을 개선하는 결과를 보였으며, 향후 교고람 약침 등의 임상 적용 연구 가 진행되어야 할 것으로 기대된다.

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      다국어 초록 (Multilingual Abstract) kakao i 다국어 번역

      Objective: This study aimed to investigate the effects of Gynostemma pentaphyllum extract (GPE) on pain and inflammatory responses in animal models.

      Methods: To evaluate the efficacy of GPE in rats with osteoarthritis induced by MIA, hind limb weight distribution, histological analysis of articular cartilage, and serum inflammatory cytokine levels were measured. In addition, pain response induced by acetic acid was assessed through writhing behavior. The effects of GPE on inflammatory cytokine and mediator protein expression were also examined in LPS-stimulated RAW 264.7 macrophage cells.

      Results:
      1. The major active components of GPE were identified as rutin and gypenoside III.
      2. Seven days after MIA administration, hind limb weight-bearing in GPE-treated rats improved significantly compared with the control group. The 300 mg/kg of GPE group showed significantly improvement comparable to that of the indomethacin treated group.
      3. GPE and indomethacin treated groups significantly ameliorated cartilage damage in osteoarthritis rats, with GPE treated group showing a degree of recovery similar to that of indomethacin treated group.
      4. Serum levels of cytokines IL-1β and IL-6 were significantly reduced in the GPE treated groups compared with control, and 300 mg/kg of GPE treated group decreased cytokine concentrations to levels comparable to indomethacin treated group.
      5. In the acetic acid induced writhing test, the frequency of writhing was significantly reduced in both GPE treated group and ibuprofen treated groups; notably, 600 mg/kg of GPE treated group resulted in a writhing frequency similar to that of the ibuprofen group.
      6. GPE did not induce cytotoxicity in LPS stimulated RAW 264.7 cells and inhibited NO production in a dose dependent manner.
      7. In OA induced knee cartilage tissue, both GPE and indomethacin treated group decreased mRNA expression and levels of IL-1β, IL-6, NOS2, Ptger2, MMP-1, MMP-3, MMP-8, and MMP-13.
      8. In LPS stimulated RAW 264.7 cells, GPE and dexamethasone reduced mRNA expression levels of IL-1β, IL-6, NOS2, Ptger2, COX-2, TNF-α, MMP-3, and MMP-13.

      Conclusion: GPE significantly alleviated knee OA and inflammation-induced pain in animal and cellular models, exhibiting therapeutic effects comparable to those of indomethacin, ibuprofen and dexamethasone. These findings suggest that GPE may serve as a potential anti-inflammatory and analgesic agent for osteoarthritis management.
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      Objective: This study aimed to investigate the effects of Gynostemma pentaphyllum extract (GPE) on pain and inflammatory responses in animal models. Methods: To evaluate the efficacy of GPE in rats with osteoarthritis induced by MIA, hind limb weight...

      Objective: This study aimed to investigate the effects of Gynostemma pentaphyllum extract (GPE) on pain and inflammatory responses in animal models.

      Methods: To evaluate the efficacy of GPE in rats with osteoarthritis induced by MIA, hind limb weight distribution, histological analysis of articular cartilage, and serum inflammatory cytokine levels were measured. In addition, pain response induced by acetic acid was assessed through writhing behavior. The effects of GPE on inflammatory cytokine and mediator protein expression were also examined in LPS-stimulated RAW 264.7 macrophage cells.

      Results:
      1. The major active components of GPE were identified as rutin and gypenoside III.
      2. Seven days after MIA administration, hind limb weight-bearing in GPE-treated rats improved significantly compared with the control group. The 300 mg/kg of GPE group showed significantly improvement comparable to that of the indomethacin treated group.
      3. GPE and indomethacin treated groups significantly ameliorated cartilage damage in osteoarthritis rats, with GPE treated group showing a degree of recovery similar to that of indomethacin treated group.
      4. Serum levels of cytokines IL-1β and IL-6 were significantly reduced in the GPE treated groups compared with control, and 300 mg/kg of GPE treated group decreased cytokine concentrations to levels comparable to indomethacin treated group.
      5. In the acetic acid induced writhing test, the frequency of writhing was significantly reduced in both GPE treated group and ibuprofen treated groups; notably, 600 mg/kg of GPE treated group resulted in a writhing frequency similar to that of the ibuprofen group.
      6. GPE did not induce cytotoxicity in LPS stimulated RAW 264.7 cells and inhibited NO production in a dose dependent manner.
      7. In OA induced knee cartilage tissue, both GPE and indomethacin treated group decreased mRNA expression and levels of IL-1β, IL-6, NOS2, Ptger2, MMP-1, MMP-3, MMP-8, and MMP-13.
      8. In LPS stimulated RAW 264.7 cells, GPE and dexamethasone reduced mRNA expression levels of IL-1β, IL-6, NOS2, Ptger2, COX-2, TNF-α, MMP-3, and MMP-13.

      Conclusion: GPE significantly alleviated knee OA and inflammation-induced pain in animal and cellular models, exhibiting therapeutic effects comparable to those of indomethacin, ibuprofen and dexamethasone. These findings suggest that GPE may serve as a potential anti-inflammatory and analgesic agent for osteoarthritis management.

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      목차 (Table of Contents)

      • Ⅰ. Introduction 1
      • Ⅱ. Materials and Methods 4
      • 1. Preparation of GPE 4
      • 2. Analysis of GPE Utilizing High Performance Liquid Chromatography 5
      • 3. Experimental Animals and Groups including in vivo and in vitro 6
      • Ⅰ. Introduction 1
      • Ⅱ. Materials and Methods 4
      • 1. Preparation of GPE 4
      • 2. Analysis of GPE Utilizing High Performance Liquid Chromatography 5
      • 3. Experimental Animals and Groups including in vivo and in vitro 6
      • 4. Acetic Acid induced Writhing Response 10
      • 5. GPE Oral Administration in OA induced Rats 11
      • 6. Incapacitance Test in OA induced Rats 12
      • 7. Macroscopic Scoring of Cartilage Degradation 13
      • 8. Serum analysis in OA induced Rats 15
      • 9. Cell Culture 16
      • 10. Cell Viability Assay 17
      • 11. NO Assay 18
      • 12. Measurement of mRNA expression levels using qRT-PCR 19
      • 13. Western blot Assay 22
      • 14. Statistical Analysis 23
      • Ⅲ. Results 24
      • 1. HPLC Analysis 24
      • 2. Effect of GPE on Acetic Acid Writhing Response 26
      • 3. Effect of GPE on Weight Bearing in OA induced Rats 28
      • 4. Effect of GPE on Cartilage Damage in the Knee Joint of OA induced Rats 31
      • 5. Effect of GPE on IL-1β in the Serum of OA induced Rats 33
      • 6. Effect of GPE on IL-6 in the Serum of OA induced Rats 35
      • 7. Effect of GPE on mRNA Expression of IL-1β in the Cartilage of OA induced Rats 37
      • 8. Effect of GPE on mRNA Expression of IL-6 in the Cartilage of OA induced Rats 39
      • 9. Effect of GPE on mRNA Expression of NOS2 in the Cartilage of OA induced Rats 41
      • 10. Effect of GPE on mRNA Expression of Ptger2 in the Cartilage of OA induced Rats 43
      • 11. Effect of GPE on mRNA Expression of MMP-1 in the Cartilage of OA induced Rats 45
      • 12. Effect of GPE on mRNA Expression of MMP-3 in the Cartilage of OA induced Rats 47
      • 13. Effect of GPE on mRNA Expression of MMP-8 in the Cartilage of OA induced Rats 49
      • 14. Effect of GPE on mRNA Expression of MMP-13 in the Cartilage of OA induced Rats 51
      • 15. Effect of GPE on IL-1β in the Cartilage of OA induced Rats 53
      • 16. Effect of GPE on IL-6 in the Cartilage of OA induced Rats 55
      • 17. Effect of GPE on NOS2 in the Cartilage of OA induced Rats 57
      • 18. Effect of GPE on Ptger2 in the Cartilage of OA induced Rats 59
      • 19. Effect of GPE on MMP-3 in the Cartilage of OA induced Rats 61
      • 20. Effect of GPE on Cell Viability in the Macrophage 63
      • 21. Effect of GPE on Nitric Oxide generation in the LPS treated Macrophage in vitro 65
      • 22. Effect of GPE on mRNA Expression of IL-1β in the LPS treated Macrophage in vitro 67
      • 23. Effect of GPE on mRNA Expression of IL-6 in the LPS treated Macrophage in vitro 69
      • 24. Effect of GPE on mRNA Expression of NOS2 in the LPS treated Macrophage in vitro 71
      • 25. Effect of GPE on mRNA Expression of Ptger2 in the LPS treated Macrophage in vitro 73
      • 26. Effect of GPE on mRNA Expression of COX-2 in the LPS treated Macrophage in vitro 75
      • 27. Effect of GPE on mRNA Expression of TNF-α in the LPS treated Macrophage in vitro 77
      • 28. Effect of GPE on mRNA Expression of MMP-3 in the LPS treated Macrophage in vitro 79
      • 29. Effect of GPE on mRNA Expression of MMP-13 in the LPS treated Macrophage in vitro 81
      • 30. Effect of GPE on IL-1β in the LPS treated Macrophage in vitro 83
      • 31. Effect of GPE on IL-6 in the LPS treated Macrophage in vitro 85
      • 32. Effect of GPE on NOS2 in the LPS treated Macrophage in vitro 87
      • 33. Effect of GPE on MMP-3 in the LPS treated Macrophage in vitro 89
      • 34. Effect of GPE on MMP-13 in the LPS treated Macrophage in vitro 91
      • Ⅳ. Discussion 93
      • References 98
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