저산소 유도성 ADAM23의 간세포암 내 신경–종양 상호작용 및 치료 저항성에 대한 영향

국문 초록 (Abstract)

저산소증(Hypoxia)은 간세포암(HCC)에서 종양의 공격성과 항암제에 대한 치료 저항성을 결정하는 중요한 요인이다. 최근 연구들은 종양 조직 내 신경세포의 구체적인 역할을 규명하여, 이들이 종양 진행에 기여할 가능성을 강조하였다. 그러나 저산소증 적응과 신경-종양 상호작용을 연결하는 분자 매개체는 여전히 알려져 있지 않다. 본 연구에서 우리는 neural adhesion-associated metalloproteinase인 A disintegrin and metalloproteinase 23 (ADAM23)을 hypoxia-inducible effector로 확인하였으며, 이는 HCC에서 대사 스트레스를 신경-종양 상호작용과 연결한다. ADAM23 발현은 CoCl₂ 처리 혹은 1% O₂의 저산소 조건에서 모두 증가하였으며, 포도당 결핍에 의해 더욱 강화되었다. ADAM23 발현의 증가는 epithelial–mesenchymal transition (EMT) 관련 단백질을 촉진하였고, 대사 스트레스 하에서 세포 생존율을 증가시켰다. Sorafenib내성HCC 세포 (Huh7R)는 ADAM23 수치가 상승하였으며, 이들의 conditioned media(CM)는 neuronal SH-SY5Y 세포에서 ADAM23, Ki67, 및 HK2 발현을 유도하였다. 또한, ADAM23이 과발현된SH-SY5Y 세포의 conditioned media는 HCC 세포에서 ADAM23 발현을 증가시켰으며, 이는 신경세포와 종양 세포 간의 상호 신호절달 메커니즘을 시사한다. Co-culture spheroid assays는 Huh7R에서 유래한 spheroids를 SH-SY5Y와 혼합했을 때, Huh7에서 유래한 spheroids와 비교하여 spheroid 크기가 증가하고 신경세포의 형관신호가 강해짐을 보여주었으며, 이는 sorafenib 내성 세포에서 ADAM23 발현이 신경세포성 표현형 변화를 촉진함을 나타낸다. 또한, HCC 환자들은 ADAM23과 HIF1α 발현 간에 양의 상관관계를 보였다. 종합하면, 우리의 발견은 ADAM23이 HCC에서 대사 스트레스와 신경-종양 상호작용을 연결하는 저산소 반응성 매개체임을 확인시킨다. ADAM23 매개 신호전달 축을 표적화하는 것은 HCC에서 약물 저항성을 극복하고 종양 진행을 억제할 유망한 치료 전략이 될 수 있다.

목차 (Table of Contents)

• 국문초록 i
• 목 차 iii
• 그림목차 v
• 제 1 장 서론 1
• 제 2 장 연구 방법 5
• 2.1. 화학물질 5
• 2.2. 세포 배양 및 화학물질 처리 5
• 2.3. Plasmid transfection and lentiviral production 6
• 2.4. Cell viability assay 7
• 2.5. Quantitative real-time PCR (qRT–PCR) 7
• 2.6. Western blot analysis 8
• 2.7. Immunohistochemistry 9
• 2.8. Statistical analysis 10
• 제 3 장 연구 결과 11
• 3.1. HCC 에서 저산소 스트레스 하에서 ADAM23 의 발현 증가 11
• 3.1.1. 화학적 저산소 스트레스 하에서 ADAM23 의 발현 증가 11
• 3.1.2. 기체 조절기반 저산소 스트레스 하에서 ADAM23 의 발현 증가 14
• 3.1.3. HIF1α과발현시 ADAM23 의 발현 증가 16
• 3.2. HCC 에서 포도당 결핍 시 ADAM23 의 발현 증가 18
• 3.3. ADAM23 과발현이 HCC 대사변화에 미치는 영향 20
• 3.4. ADAM23 과발현이 세포 생존율에 미치는 영향 22
• 3.5. HCC 환자에서 HIF1α와 ADAM23 의 공동 발현 24
• 3.6. ADAM23 가 HCC 와 신경세포간 상호작용에 미치는 영향 26
• 3.6.1. ADAM23 과발현이 신경 세포 생존율 및 대사에 미치는 영향 26
• 3.6.2. 항암제 내성 HCC 및 conditioned media 에서 ADAM23 발현 증가 28
• 3.6.3. 항암제 내성 HCC conditioned media 를 처리한 신경세포에서 ADAM23 증가 및 대사 변화 30
• 3.7. Huh7 와 SH-SY5Y 세포의 공동 배양 32
• 제 4 장 고찰 및 결론 34
• 참고문헌 38
• Abstract 46