기체크로마토그래피-질량분석법 활용 토끼 혈청 내 오메가-3,6 다가불포화지방산의 정량분석

국문 초록 (Abstract)

다가불포화지방산들과 콜레스테롤 관련 질환의 상관성을 규명하는 이전의 연구에서는 일반적으로 포화지방산의 대신 다가불포화지방산을 섭취하였을 때 관상동맥질환의 위험을 감소시킨다고 보고되었지만 현재까지 혈청 내 개별적인 다가불포화지방산의 농도와 고콜레스테롤혈증과 메커니즘 상관성에 대한 연구는 부족하다. 따라서 기존의 콜레스테롤 섭취에 따른 포화지방산 및 불포화지방산들에 대한 연구에서 더 나아가 개별 지방산 농도 간의 연관성 여부를 확인하는 연구를 수행하고자 하였다.따라서, 본 연구에서는 오메가-3,6 다가불포화지방산의 전구체인 알파-리놀렌산(ALA), 리놀레산(LA)과 대표적인 오메가-3,6 다가불포화지방산인 에이코사펜타엔산(EPA), 도코사헥사엔산(DHA) 그리고 아라키돈산(AA)를 포함한 6가지 물질을 분석 대상으로 선정하였다. 일반적으로 높은 감도와 재현성을 가지는 기체 크로마토그래피-질량분석법(gas chromatography-mass spectrometry, GC-MS)을 이용하여 6가지 다가불포화지방산의 개별 정량분석법을 확립하고, 고콜레스테롤혈증 토끼 시료와 대조군의 체내 농도 비교를 통해 심혈관계 질환에 가장 높은 영향으로 보고되고 있는 콜레스테롤의 섭취에 따른 다가불포화지방산들의 대사상관성을 토끼를 대상으로 확인하고자 하였다.다가불포화지방산 정량분석법의 최적화를 위해, 고체상추출법의 추출효율과 선택성을 비교하여 Oasis HLB 카트리지로 시료 전처리를 진행하였다. 비휘발성인 6가지 다가불포화지방산 분석물질을 trimethylsilyl (TMS) 형태로 N-methyl-N-trimethylsilyltrifluoroactamaide (MSTFA)를 이용하여 유도체화 한 후 분석하였으며, 분석 컬럼은 HP-5 (fused silica cross-linked 5% phenyl methyl polysiloxane, 컬럼길이 30 m, 내경 0.32 mm, 필름두께 0.25 μm)를 사용하였다.위와 같이 최적화된 실험방법으로 유효성을 측정한 결과, 혈청의 경우 추출효율은 73.1 ∼ 103.9 %, 재현성은 0.8 ∼ 15.7 %, 정확성은 79.5 ∼ 112.3 %로 나타났다. 유효성이 검증된 정량분석법을 사용하여 고콜레스테롤혈증 토끼 시료를 분석한 결과, 콜레스테롤 식이를 한 그룹과 염증을 일으킨 그룹에서 다가불포화지방산 중 LA, AA가 증가하는 것으로 나타났다. 표준식이 그룹과 콜레스테롤 식이를 한 그룹을 비교하였을 때 유의성 있는 결과를 나타내었다.